"Οι περισσότερες από τις λοιμώξεις που συνδέονται με τον καρκίνο του ανθρώπου είναι κοινές στους ανθρώπινους πληθυσμούς- είναι πανταχού παρούσες. Ήταν παρούσες καθ' όλη τη διάρκεια της ανθρώπινης εξελικτικής διαδικασίας". --- Harald Zur Hausen....
Για πολλές δεκαετίες, οι επιστήμονες προσπαθούσαν να αποδώσουν τον καρκίνο στους "ιούς". Προσπάθησαν να συνδέσουν τόσο τον απλό έρπητα όσο και τον HIV με τον καρκίνο, αλλά απλώς δεν μπορούσαν να βρουν αρκετά πειστικές "αποδείξεις" για να κάνουν αυτές τις υποθέσεις να ισχύουν. Το 1968, το Εθνικό Ινστιτούτο Καρκίνου (NCI) δημιούργησε ένα Ειδικό Πρόγραμμα για τον Καρκίνο με Ιούς, το οποίο προσπάθησε να εντοπίσει τους "ιούς" του ανθρώπινου καρκίνου, ώστε να είναι δυνατόν να εμβολιαστούν και να προλάβουν αυτές τις παθήσεις. Ωστόσο, το πρόγραμμα αυτό κατέληξε σε αποτυχία και μέχρι το 1980, η επιστημονική κοινότητα είχε καταλήξει σε συμφωνία ότι οι προσπάθειες να αποδοθεί ο καρκίνος στους "ιούς" ήταν άκαρπες:
"Ωστόσο, παρά τις έρευνες που διήρκεσαν περισσότερο από μια δεκαετία, η προσπάθεια απέτυχε σε μεγάλο βαθμό και στα τέλη της δεκαετίας του 1970 πολλοί ερευνητές είχαν απογοητευτεί από την ιδέα. Όταν το πρόγραμμα τερματίστηκε το 1980, είχε διαμορφωθεί μια ιατρική συναίνεση ότι οι ιοί δεν αποτελούσαν σημαντική αιτία των ανθρώπινων καρκίνων".
https://www.cancerresearch.org/en-us/blog/august-2014/when-aids-was-a-cancer
Ευτυχώς για όσους επέμεναν να προωθούν αυτή την απατηλή σύνδεση μεταξύ "ιών" και καρκίνου, ήρθε το 1983 ο Γερμανός ιολόγος Harald Zur Hausen να σώσει την κατάσταση. Αυτός ο άνθρωπος πιστώθηκε με την ανακάλυψη της λεγόμενης σχέσης μεταξύ του ιού των ανθρώπινων θηλωμάτων (HPV) και του καρκίνου του τραχήλου της μήτρας. Αυτό το έκανε με την "ανακάλυψη" υβριδοποιημένων κλωνοποιημένων τμημάτων DNA που λέγεται ότι ήταν HPV σε ορισμένους ασθενείς με καρκίνο του τραχήλου της μήτρας. Ωστόσο, ακόμη και με την προφανή ανακάλυψη από τον Zur Hausen αυτής της υποτιθέμενης σχέσης, πολλοί ήταν πολύ επιφυλακτικοί απέναντι στα αποτελέσματά του, και για καλό λόγο.
Πρώτα ένα σύντομο ιστορικό για το έργο του:
"Ο Zur Hausen ξεκίνησε την αναζήτησή του αναζητώντας ιούς στα ανθρώπινα κονδυλώματα των γεννητικών οργάνων, οδηγώντας στην ανακάλυψη ενός νέου τύπου ιού θηλωμάτων, τον οποίο ονόμασε HPV-6 (είχαν ήδη ανακαλυφθεί οι εκδόσεις ένα έως πέντε). Προς μεγάλη απογοήτευσή του, η ομάδα του δεν μπόρεσε να βρει τον HPV-6 σε δείγματα καρκίνου του τραχήλου της μήτρας, αλλά τον οδήγησε σε έναν στενά συγγενή θηλωματοϊό, που τελικά ονομάστηκε HPV-11. Το 1983 ο zur Hausen δημοσίευσε στοιχεία ότι ο HPV-11 ήταν παρών σε τρία από τα 24 δείγματα καρκίνου του τραχήλου της μήτρας που εξέτασε.
Και τώρα αυτός και η ομάδα του είχαν πάρει φόρα. Έγινε φανερό ότι υπήρχαν πολλοί διαφορετικοί τύποι HPV. Συνέχισαν την έρευνά τους και ανακάλυψαν τον HPV-16, ο οποίος ανιχνεύθηκε στους μισούς περίπου καρκίνους του τραχήλου της μήτρας, και στη συνέχεια τον HPV-18, ο οποίος υπήρχε σε περίπου ένα στα πέντε δείγματα καρκίνου του τραχήλου της μήτρας.
Γινόταν σαφές ότι η μόλυνση με αυτούς τους δύο τύπους συνδεόταν στενά με τον καρκίνο του τραχήλου της μήτρας - μια ανακάλυψη που τελικά χάρισε στο zur Hausen το βραβείο Νόμπελ".
Έγινε σαφές ότι υπήρχε σύνδεση μεταξύ του HPV και του καρκίνου του τραχήλου της μήτρας; Μηδενικές περιπτώσεις καρκίνου του τραχήλου της μήτρας για τον HPV-6; 3 στις 24 για τον HPV-11; Περίπου 50% για τον HPV-16; 1 στους 5 για τον HPV-18; Αυτές οι στατιστικές είναι που έκαναν "ξεκάθαρο" ότι υπήρχε σύνδεση μεταξύ του HPV και του καρκίνου; Θα ήταν ακριβές να δηλώσουμε ότι έγινε σαφές ότι ανιχνεύθηκε τυχαίο DNA που υποτίθεται ότι ανήκει σε πρόσφατα "ανακαλυφθέντες" HPV, αλλά σίγουρα δεν υπήρχε καμία απόδειξη ότι υπήρχε κάποιος "ιός". Αποκτούμε λίγη περισσότερη σαφήνεια από το κείμενο για το βραβείο Νόμπελ του Zur Hausen:
--> Ανακάλυψη, που βραβεύθηκε με Νόμπελ, της σχέσης HPV-καρκίνου του τραχήλου της μήτρας, έχει ήδη αντίκτυπο στην Ιατρική
"Αλλά αυτές οι καινοτομίες δεν θα ήταν δυνατές χωρίς την επιμονή ενός ανθρώπου, του επιστήμονα που πρότεινε και στη συνέχεια απέδειξε τη σχέση μεταξύ του καρκίνου του τραχήλου της μήτρας και του HPV. Η ανακάλυψη προκάλεσε μεγάλη αναστάτωση εκείνη την εποχή - στις αρχές της δεκαετίας του 1980 - επειδή η πλειοψηφία των ειδικών δεν πίστευε ότι οι ιοί μπορούσαν να προκαλέσουν καρκίνο, και οι λίγοι που το πίστευαν επικεντρώνονταν σε έναν εντελώς διαφορετικό ιό.
--> Ενάντια στο δόγμα της εποχής
Αυτός ο επιστήμονας ήταν ο Harald zur Hausen, MD, ομότιμος καθηγητής που εργάζεται σήμερα στο Γερμανικό Κέντρο Έρευνας για τον Καρκίνο, στη Χαϊδελβέργη, και πρώην επιστημονικός διευθυντής του εν λόγω Κέντρου. Η ανακάλυψη αυτή μόλις του χάρισε το μισό από το βραβείο Νόμπελ Φυσιολογίας και Ιατρικής του 2008, το οποίο μοιράστηκε με 2 Γάλλους επιστήμονες που ανακάλυψαν τον ιό της ανθρώπινης ανοσοανεπάρκειας (HIV). Πρόκειται για το τελευταίο και πιο σημαντικό από τα πολλά βραβεία που έχει ήδη κερδίσει για την έρευνα αυτή, συμπεριλαμβανομένου του βραβείου για το επίτευγμα ζωής της Αμερικανικής Ένωσης Έρευνας για τον Καρκίνο.
Η βράβευση του Νόμπελ ανέφερε ότι ο Δρ zur Hausen πήγε "ενάντια στο τρέχον δόγμα της εποχής" και η πρότασή του για τον ρόλο του HPV στον καρκίνο του τραχήλου της μήτρας ήρθε σε αντίθεση με τις επικρατούσες απόψεις της δεκαετίας του 1970.
"Η πρότασή μου δεν ήταν πολύ ευπρόσδεκτη εκείνη την εποχή", θυμήθηκε ο Dr. zur Hausen σε μια συνέντευξη που καταγράφηκε στο nobelprize.org μετά την ανακοίνωση. Εκείνη την εποχή, πολλοί ερευνητές εστίαζαν την προσοχή τους στον ιό του απλού έρπητα- στην πραγματικότητα, παρέδωσε 1 από τις πρώτες εργασίες του προτείνοντας τον ιό HPV ως αιτία του καρκίνου του τραχήλου της μήτρας σε μια συνάντηση στη Φλόριντα που είχε προγραμματιστεί ειδικά για να συζητήσει την έρευνα για τον απλό έρπητα. "Ήμουν μια μοναχική φωνή σε εκείνη τη συνάντηση", είπε.
Χρειάστηκε αρκετός χρόνος για να συγκεντρώσει στοιχεία που να υποστηρίζουν την πρόταση. Όπως εξηγεί το βραβείο Νόμπελ, ο Dr. zur Hausen υπέθεσε ότι τα καρκινικά κύτταρα, αν περιείχαν έναν ογκογόνο ιό, θα έπρεπε να φιλοξενούν ιικό DNA ενσωματωμένο στο γονιδίωμά τους. Χρειάστηκαν όμως περισσότερα από 10 χρόνια για να αποδειχθεί αυτό, επειδή η διαδικασία ήταν περίπλοκη λόγω του γεγονότος ότι μόνο τμήματα του ιϊκού DNA ενσωματώνονταν στο γονιδίωμα του ξενιστή.
Η σημαντική ανακάλυψη ήρθε στις αρχές της δεκαετίας του 1980, όταν ο Dr. zur Hausen και η ομάδα του βρήκαν νέο HPV-DNA σε βιοψίες καρκίνου του τραχήλου της μήτρας, ανακαλύπτοντας έτσι τον καρκινογόνο ιό τύπου HPV 16 το 1983. Ένα χρόνο αργότερα, η ομάδα κλωνοποίησε τους HPV 16 και HPV 18 από ασθενείς με καρκίνο του τραχήλου της μήτρας. Η βράβευση για το Νόμπελ σημειώνει ότι η ομάδα διέθεσε αυτούς τους κλώνους στην επιστημονική κοινότητα, και ο Δρ zur Hausen σχολίασε ότι "διασκορπίστηκαν πολύ ελεύθερα σε όλο τον κόσμο". Κατά ειρωνικό τρόπο, άλλοι αργότερα κατοχύρωσαν με δίπλωμα ευρεσιτεχνίας και επωφελήθηκαν από αυτή την έρευνα.
Έκτοτε, οι HPV 16 και 18 βρέθηκαν σταθερά στο 70% περίπου των βιοψιών καρκίνου του τραχήλου της μήτρας σε όλο τον κόσμο, ανέφερε η επιτροπή Νόμπελ. Η έρευνα αυτή οδήγησε τελικά στην ανάπτυξη ενός εμβολίου κατά του HPV 16 και του HPV 18, το οποίο παρέχει πάνω από 95% προστασία από αυτές τις λοιμώξεις. Ωστόσο, η επιτροπή ήταν επιφυλακτική στις προβλέψεις της για τον αντίκτυπο που θα έχει αυτό, σχολιάζοντας ότι "μπορεί να μειώσει την ανάγκη για χειρουργική επέμβαση και το παγκόσμιο βάρος του καρκίνου του τραχήλου της μήτρας".
--> Η επαναστατική ιδέα χρειάστηκε χρόνο για να γίνει αποδεκτή
Η διαπίστωση ότι ο HPV προκαλεί καρκίνο του τραχήλου της μήτρας ήταν "απολύτως επαναστατική", σχολίασε ο Maurie Markman MD, καθηγητής γυναικολογικής ιατρικής ογκολογίας στο Κέντρο Καρκίνου MD Anderson του Πανεπιστημίου του Τέξας, στο Χιούστον, ο οποίος ενεργεί ως σύμβουλος σύνταξης στο Medscape Oncology.
"Ήταν η πρώτη φορά που κατέστη δυνατό να οριστεί με σαφήνεια ένας μολυσματικός παράγοντας ως αιτία ενός καρκίνου, να καταδειχθεί η διαδικασία με την οποία το ιϊκό DNA επηρεάζει την ανάπτυξη του καρκίνου και, τέλος, πώς ένα εμβόλιο θα μπορούσε ενδεχομένως να αποτρέψει την ανάπτυξη του καρκίνου", σχολίασε ο Dr. Markman.
Η ιδέα ήταν τόσο επαναστατική που χρειάστηκε αρκετός χρόνος για να γίνει το εύρημα αποδεκτό από την επιστημονική κοινότητα, σχολίασε ο Attila Lorincz, PhD, καθηγητής μοριακής επιδημιολογίας στο Ινστιτούτο Προληπτικής Ιατρικής Wolfson, στο Ηνωμένο Βασίλειο. Πολλοί ειδικοί δεν μπορούσαν να πιστέψουν ότι ένας ιός θα μπορούσε να προκαλέσει καρκίνο και επικεντρώνονταν αντ' αυτού σε άλλους περιβαλλοντικούς παράγοντες και γενετικές προδιαθέσεις, είπε. "Πέρασαν άλλα 10 χρόνια προτού η πλειοψηφία των σκεπτικιστών σωπάσει, και ακόμη και πριν από λίγα χρόνια, υπήρχαν ακόμη μερικοί ανυποχώρητοι παλαιότεροι γιατροί και επιστήμονες".
Ο Zur Hausen ΥΠEΘΕΣΕ ότι αν υπήρχαν "ογκογόνοι ιοί", τότε το "ιογενές" DNA θα ενσωματωνόταν στα γονιδιώματα των όγκων. Με άλλα λόγια, δεν χρειαζόταν να βρεθεί ένας "ιός" παρά μόνο τα θραύσματα του DNA που συνδέονται με αυτόν. Ωστόσο, η ανίχνευση "ιογενούς" RNA/DNA είναι ουσιαστικά χωρίς νόημα, όπως φάνηκε πρόσφατα από τις δηλώσεις αποποίησης ευθυνών σε τεστ PCR "SARS-COV-2" όπως αυτό:
"Η ανίχνευση ιϊκού RNA μπορεί να μην υποδεικνύει την παρουσία μολυσματικού ιού ή ότι ο 2019-nCoV είναι ο αιτιολογικός παράγοντας για τα κλινικά συμπτώματα".
Ο Zur Hausen βρήκε νέο DNA, όχι νέο "ιό". Ακόμα και με αυτή την ανακάλυψη, οι συνάδελφοί του και ακόμα και η συγγραφή του βραβείου Νόμπελ ήταν επιφυλακτικοί. Ίσως ήθελαν να δουν πραγματικά καθαρισμένο/απομονωμένο HPV που λήφθηκε απευθείας από έναν άρρωστο ασθενή αντί για τυχαία υβριδοποιημένα θραύσματα DNA που υποτίθεται ότι είναι ένας νέος "ιός"; Ίσως ήθελαν να δουν αποδείξεις ότι αυτός ο "ιός" ήταν πράγματι παθογόνος; Η εύρεση τυχαίων κομματιών DNA σε κάποιους ασθενείς με καρκίνο του τραχήλου της μήτρας και ο ισχυρισμός ότι πρόκειται για μια νέα έκδοση του HPV και την αιτία του εν λόγω καρκίνου απαιτεί αδιάσειστες αποδείξεις. Αυτό όμως δεν είναι η πραγματικότητα.
Για να επιχειρήσει κανείς έστω και να πει ότι το DNA που εντόπισε ο Zur Hausen ήταν "ιός", θα έπρεπε να αποδειχθεί ότι υπάρχει κάτι τέτοιο όπως ο ανθρώπινος "ιός των θηλωμάτων", προτού μπορέσει κανείς να διακλαδώσει εκατοντάδες διαφορετικές εκδοχές του και να τις ισχυριστεί ως αιτία του καρκίνου του τραχήλου της μήτρας. Αυτό προφανώς εγείρει το ερώτημα: Έχει ποτέ καθαριστεί και απομονωθεί σωστά ο HPV απευθείας από έναν άρρωστο ασθενή και στη συνέχεια αποδειχθεί παθογόνος με ναρκωτικό τρόπο;
Η αναζήτηση μιας απάντησης σε αυτό το ερώτημα με οδήγησε σε μια εργασία των Maurice Strauss, Henry Bunting και Joseph Melnick του 1949. Αυτό που έκαναν οι ερευνητές ήταν να συλλέξουν κονδυλώματα από τα χέρια και τα πόδια παιδιών, να αλέσουν τα κονδυλώματα, να αναμείξουν την προκύπτουσα ακαθαρσία των ιστών με οξείδιο του αλουμινίου και νερό, να περιστρέψουν το μείγμα πολύ γρήγορα για λίγο, και στη συνέχεια να πάρουν το υπερκείμενο υγρό και να το σκιαγραφήσουν σε χρώμιο για να δουν το δείγμα σε ηλεκτρονικό μικροσκόπιο. Στη συνέχεια, οι ερευνητές υπέθεσαν ότι όποια σωματίδια είδαν που έμοιαζαν με "ιό" ήταν στην πραγματικότητα ένας τέτοιος. Σε αυτή την περίπτωση, οι τρεις ερευνητές συνέκριναν τα σωματίδια που επέλεξαν με εκείνα που βρέθηκαν στα φυτά και ισχυρίστηκαν ότι είχαν ανακαλύψει έναν "ιό" καθώς τα σωματίδια έμοιαζαν με τους "ιούς" των φυτών. Απέδειξαν πράγματι οι Strauss, Bunting και Melnick ότι αυτά τα σωματίδια που θεωρήθηκαν ως HPV ήταν ένας πραγματικός "ιός"; Όχι, καθώς δεν υπήρξε καμία απολύτως προσπάθεια απόδειξης της παθογένειας στην εργασία. Το μόνο που έκαναν οι τρεις ερευνητές ήταν να δείξουν τυχαία σωματίδια και να δηλώσουν ότι πρόκειται για "ιό", εξ ου και τα σωματίδια που μοιάζουν με "ιό" στον τίτλο και στην περίληψη της εργασίας. Τα κυριότερα σημεία παρακάτω:
--> "Κρυσταλλικά" σωματίδια τύπου ιού από δερματικά θηλώματα που χαρακτηρίζονται από ενδοπυρηνικά σωμάτια εγκλεισμού.
"Πρόκειται για μια έκθεση παρατήρησης με το ηλεκτρονικό μικροσκόπιο σωματιδίων που μοιάζουν με ιούς και έχουν ληφθεί από θηλώματα του δέρματος. Τα θηλώματα αυτά χαρακτηρίζονται από την παρουσία ενδοπυρηνικών εγκλεισμάτων, σωμάτων, και τα στοιχειώδη σώματα που λαμβάνονται από αυτά τείνουν να διατάσσονται σε ένα κρυσταλλοειδές μοτίβο. Πέντε τέτοιες βλάβες μελετήθηκαν με ηλεκτρονικό μικροσκόπιο".
"Η προετοιμασία του υλικού ήταν η ίδια σε όλες τις περιπτώσεις. Το ήμισυ κάθε βλάβης στερεώθηκε σε φορμόλη για τομές ιστών, ενώ το υπόλοιπο αλέστηκε αμέσως με αλούντο και απεσταγμένο νερό και υποβλήθηκε σε διαυγαστική φυγοκέντρηση του υπερκείμενου υγρού στις 2.000 σ.α.λ. για 5 λεπτά, ακολουθούμενη από φυγοκέντρηση του προκύπτοντος υπερκείμενου υγρού στις 6.000 σ.α.λ. για 15 έως 45 λεπτά. Μικρές σταγόνες του υπερκείμενου υγρού των 6.000 r.p.m. και του επανααιωρούμενου ιζήματος τοποθετήθηκαν σε μονωτήρες κολλοδίου για την ηλεκτρονική μικροσκοπία. Αυτές σκιαγραφήθηκαν με χρώμιο υπό γωνία 1:7.
Η εξέταση με το ηλεκτρονικό μικροσκόπιο (RCA τύπου EMU) αποκάλυψε σφαιρικά σωματίδια σε μεγαλύτερη αφθονία στο ίζημα των 6.000 r.p.m. του εναιωρήματος από τα θηλώματα που παρουσίαζαν ενδοπυρηνικά σωμάτια εγκλεισμού. Τα σωματίδια αυτά ήταν συχνά διατεταγμένα σε κρυσταλλοειδείς συστάδες ή στρώματα με μέση διάμετρο 52 mp και εύρος 50 έως 53 mp (Εικ. 1). Μια τέτοια διάταξη μοιάζει με εκείνη που έχει παρατηρηθεί προηγουμένως για κρυσταλλικούς φυτικούς ιούς (Price, Williams, Wyckoff). Όταν τα σωματίδια αυτά δεν ήταν σε κρυσταλλική διάταξη, είχαν μέση διάμετρο 68 mp με εύρος 56 έως 80 mp".
"Η έρευνα στο συσσωρευμένο υλικό του εργαστηρίου χειρουργικής παθολογίας του νοσοκομείου New Haven αποκάλυψε άλλες 31 δερματικές αλλοιώσεις ιστολογικά παρόμοιες με εκείνες των θηλωμάτων με εγκλεισμό σώματος που περιγράφονται παραπάνω. Οι ηλικίες των ασθενών αυτών κυμαίνονταν από 2% έως 68 έτη. Υπήρχαν επίσης 158 τυπικές βερρούκες από άτομα ηλικίας 5 έως 80 ετών.
Περίληψη. Σωματίδια που μοιάζουν με ιούς και τείνουν να είναι διατεταγμένα σε ένα κρυσταλλοειδές μοτίβο παρατηρήθηκαν με ηλεκτρονικό μικροσκόπιο σε μια μελέτη αιωρημάτων 5 θηλωμάτων του δέρματος. Η ιστολογική εξέταση των ίδιων ιστών αποκάλυψε ενδοπυρηνικά σωμάτια εγκλεισμού και χαρακτηριστικές κυτταροπλασματικές μάζες στα κύτταρα της υπερπλαστικής επιδερμίδας. Τριάντα μία βλάβες με παρόμοια ιστολογική εμφάνιση συναντήθηκαν μαζί με 158 τυπικές βερύκες σε μια ανασκόπηση χειρουργικού παθολογοανατομικού υλικού".
https://journals.sagepub.com/doi/abs/10.3181/00379727-72-17328
Το 1952, οι Melnick, Bunting και Strauss το ξανασκέφτηκαν με μια μελέτη παρακολούθησης. Κατά την ανάγνωση, γίνεται φανερό ότι ακόμα και τρία χρόνια μετά τα αρχικά τους ευρήματα, οι τρεις ερευνητές δεν μπορούσαν ακόμα να ισχυριστούν ότι ο HPV είναι "ιός": Αναφέρονται και πάλι στον HPV ως σωματίδια που μοιάζουν με "ιούς". Κατά την εξέταση και πάλι υπό ΗΜ, αναφέρονται σε σχέδια και kodachromes για να μην συγχέουν τυχόν μάζες με τη χρωματίνη (μια ουσία μέσα σε ένα χρωμόσωμα που αποτελείται από πρωτεΐνες, RNA και DNA). Δηλώνουν ότι η κρυσταλλική δομή ήταν "πιθανώς" "ιός" κυρίως λόγω του παρόμοιου μοτίβου που σχημάτιζε με τους φυτικούς "ιούς". Παραδέχονται ότι το υλικό που εξέτασαν ήταν ακάθαρτο, ότι οι ιστοπαθολογικές μεταβολές σχετίζονταν ΠΡΟΦΑΝΩΣ με σωματίδια που έμοιαζαν με "ιούς" και ότι το ηωσινόφιλο σώμα εγκλείσματος ήταν ΠΡΟΦΑΝΩΣ ενδεικτικό της παρουσίας ενός "ιού". Έτσι, για άλλη μια φορά, καμία απόδειξη ότι ο HPV είναι ένας "ιός":"
--> ΗΛΕΚΤΡΟΝΙΚΗ ΜΙΚΡΟΣΚΟΠΙΑ ΤΩΝ ΙΩΝ ΤΟΥ ΑΝΘΡΩΠΙΝΟΥ ΘΗΛΩΜΑΤΟΣ, ΤΟΥ ΚΟΝΤΑΓΓΕΙΩΔΟΥΣ ΜΑΛΑΚΥΝΟΥ ΚΑΙ ΤΟΥ ΕΜΒΟΛΙΟΥ, ΣΥΜΠΕΡΙΛΑΜΒΑΝΟΜΕΝΩΝ ΠΑΡΑΤΗΡΗΣΕΩΝ ΣΧΕΤΙΚΑ ΜΕ ΤΟ ΣΧΗΜΑΤΙΣΜΟ ΤΟΥ ΙΟΥ ΕΝΤΟΣ ΤΟΥ ΚΥΤΤΑΡΟΥ
"Η συζήτηση αυτή θα ασχοληθεί με μελέτες ηλεκτρονικής μικροσκοπίας δύο αλλοιώσεων του ανθρώπινου δέρματος, του θηλώματος και του μολυσματικού μαλάκιου. Και οι δύο ασθένειες είναι μολυσματικές, οι αιτιολογικοί παράγοντες είναι διηθητικοί. Οι εργασίες πάνω σε αυτούς τους ιούς έχουν περιοριστεί, ωστόσο, στο ότι ο μόνος γνωστός ξενιστής είναι ο άνθρωπος. Οι εργασίες μας για το ανθρώπινο θηλώμα πραγματοποιήθηκαν με συμβατικό τρόπο, δηλαδή απομόνωση των κυτταρικών συστατικών με διαφορική φυγοκέντρηση και εξέτασή τους στο ηλεκτρονικό μικροσκόπιο".
"Το υλικό από τα θηλώματα και από τα δείγματα ελέγχου αλέθεται με alundum και απεσταγμένο νερό, φυγοκεντρείται στις 2.000 r.p.m. για πέντε λεπτά και το υπερκείμενο υγρό που προκύπτει υποβάλλεται σε περαιτέρω φυγοκέντρηση στις 6.000 r.p.m. για 45 λεπτά. Το ίζημα επαναιωρείται σε μικρό όγκο αποσταγμένου νερού (περίπου 1 ml). Για την ηλεκτρονική μικροσκοπία μια μικρή σταγόνα τοποθετείται σε οθόνη κολλοδίου και σκιαγραφείται με χρώμιο ή παλλάδιο πριν από την εξέταση. Παρόλο που μεμονωμένα σωματίδια μπορεί να βρεθούν σε όλα τα δείγματα, τα σωματίδια διατάσσονται σε κρυσταλλοειδείς συστάδες με τέτοια κανονικότητα που η διάταξη αυτή φαίνεται να είναι χαρακτηριστική".
"Η ιστολογική εμφάνιση των θηλωμάτων που αποδίδουν σωματίδια που μοιάζουν με ιούς περιγράφεται λεπτομερώς σε μια εργασία των Bunting και Strauss".
"Η απόλυτη ταυτοποίηση των ενδοπυρηνικών σωμάτων εγκλεισμού στα παρασκευάσματα Feulgen, προς αποφυγή σύγχυσης με μάζες χρωματίνης, εξασφαλίστηκε με σύγκριση με σχέδια και kodachromes των ίδιων κυττάρων όταν προηγουμένως είχαν χρωματιστεί με αιματοξυλίνη και ηωσίνη. Οι φωτομικρογραφίες λήφθηκαν σε μήκη κύματος 2650 και 2800 k και αξιολογήθηκαν οπτικά".
"Οι σχηματισμοί που απομονώθηκαν από αυτά τα θηλώματα αποτελούν την πρώτη κρυσταλλική ουσία αυτού του τύπου που λαμβάνεται από οποιαδήποτε ζωική ανάπτυξη. Αυτό το χαρακτηριστικό σωματίδιο είναι πιθανώς ιϊκής φύσεως και υπεύθυνο για την εμφάνιση και την ανάπτυξη της κονδυλωμάτων. Στο παρελθόν, έχουν βρεθεί σφαιρικοί ιοί που δίνουν τέτοια κρυσταλλικά σχήματα. Αυτό ίσχυε ιδιαίτερα για ορισμένους φυτικούς ιούς και, κατά περίπτωση, πολύ καθαρισμένα παρασκευάσματα σφαιρικών βακτηριοφάγων έδωσαν παρόμοια μοτίβα. Ωστόσο, το γεγονός ότι σχετικά ακάθαρτα παρασκευάσματα εναιωρημάτων αυτών των κονδυλωμάτων αποδίδουν τέτοια μοτίβα υποδηλώνει τον έντονο βαθμό προσβολής των σωματιδίων αυτών μεταξύ τους και την ομοιομορφία τους. Η διάμετρος αυτών των σωματιδίων, 52 mp, είναι της ίδιας τάξης μεγέθους με εκείνη που βρέθηκε για τον ιό του θηλώματος του κουνελιού Shope".
"Οι χαρακτηριστικές ιστοπαθολογικές μεταβολές που παρατηρούνται σε αυτές τις βλάβες, που δεν παρατηρούνται σε κάθε κοινή κονδυλωμάτων, προφανώς συνδέονται με την παρουσία των σωματιδίων που μοιάζουν με ιό και περιγράφονται παραπάνω. Θα μπορούσε κανείς να συμπεράνει ότι η φυσιολογική ανάπτυξη των επιδερμικών κυττάρων είχε διαστρεβλωθεί σε μεγαλύτερο βαθμό από αυτόν που συμβαίνει στην απλή υπερπλασία. Το ηωσινόφιλο ενδοπυρηνικό σώμα εγκλεισμού που πιθανώς είναι ενδεικτικό της παρουσίας του ιού, είναι μικρό όταν πρωτοεμφανίζεται στην πρώτη ή δεύτερη στιβάδα κυττάρων πάνω από τη βασική. Διπλασιάζεται σε μέγεθος μέχρι τη στιγμή που χάνεται η ταυτότητά του στους πυκνωτικούς πυρήνες της παρακερατωτικής κεράτινης στιβάδας".
https://nyaspubs.onlinelibrary.wiley.com/doi/10.1111/j.1749-6632.1952.tb39990.x
Από τα κυριότερα σημεία που λαμβάνονται από τις δύο παραπάνω εργασίες, είναι ασφαλές να πούμε ότι ο HPV δεν καθαρίστηκε/απομονώθηκε ποτέ σωστά ούτε αποδείχθηκε παθογόνος. Οι ερευνητές διάλεξαν τα σωματίδια από ακάθαρτα δείγματα που υπέθεσαν ότι ήταν ο "ιός" με βάση εικόνες από φυτικούς "ιούς". Τώρα που έχουμε βγάλει από τη μέση την έλλειψη ενός καθαρισμένου/απομονωμένου "ιού" HPV, μπορούμε να προχωρήσουμε μερικές δεκαετίες μπροστά, στο 1983, προκειμένου να δούμε τι στοιχεία μπόρεσε να επινοήσει ο Harald Zur Hausen προκειμένου να ισχυριστεί ότι τα σωματίδια που δεν καθαρίστηκαν/απομονώθηκαν ποτέ και θεωρήθηκαν ότι είναι ο HPV προκαλούν καρκίνο του τραχήλου της μήτρας.
Διαβάζοντας το έγγραφο, θα διαπιστώσετε ότι κανένα σωματίδιο που υποτίθεται ότι είναι "ιός" δεν βρέθηκε ούτε χρησιμοποιήθηκε ποτέ σε αυτή τη μελέτη. Το μόνο που υποστηρίχθηκε είναι η ανίχνευση "νέου" DNA από ένα δείγμα καρκίνου του τραχήλου της μήτρας, το οποίο στη συνέχεια θεωρήθηκε ότι είναι ένας νέος HPV με βάση το αν το DNA υβριδοποιήθηκε με άλλες αλληλουχίες HPV. Ο Zur Hausen κλωνοποίησε αυτό το DNA σε έναν φάγο και στη συνέχεια χρησιμοποίησε αυτό το συνθετικό δημιούργημα για να εξετάσει άλλα δείγματα καρκίνου και βρήκε μικτά αποτελέσματα. Το DNA του HPV παρατηρήθηκε σε καλοήθη μη καρκινικά δείγματα και βρέθηκε με ασυνέπεια σε συναφείς καρκίνους. Διαπίστωσε επίσης μια γεωγραφική διαφορά μεταξύ των δειγμάτων που εξετάστηκαν στη Γερμανία, όπου το DNA βρέθηκε στο 61% των δειγμάτων, και εκείνων στην Κένυα και τη Βραζιλία, όπου βρέθηκε στο 34% των δειγμάτων. Είναι ενδιαφέρον ότι ο Zur Hausen παραδέχτηκε ότι ο χαρακτηρισμός των τύπων των "θηλωμάτων" βασίστηκε αποκλειστικά στην ανάλυση του DNA μετά από μοριακή κλωνοποίηση και ότι πολλοί από τους ταξινομημένους τύπους είχαν εντοπιστεί μόνο από το DNA των όγκων που έφεραν αυτά τα γονιδιώματα. Παραδέχθηκε επίσης ότι το DNA δεν είχε ακόμη αποδειχθεί σε σωματίδια "θηλωμάτων", επιβεβαιώνοντας έτσι ότι τα στελέχη HPV υπάρχουν μόνο ως αλληλουχίες DNA και όχι ως φυσικά σωματίδια. Για να βάλει ένα τελευταίο καρφί στα δικά του ευρήματα, ο Zur Hausen κατέληξε στο συμπέρασμα ότι η τακτική παρουσία DNA HPV σε δείγματα βιοψίας καρκίνου των γεννητικών οργάνων δεν αποδεικνύει αιτιολογική εμπλοκή αυτών των λοιμώξεων από "ιούς". Παρακάτω μπορείτε να διαβάσετε το σύνολο των πλασματικών στοιχείων για τον ισχυρισμό ότι ο HPV προκαλεί καρκίνο του τραχήλου της μήτρας:
--> DNA ενός θηλωματικού ιού από ένα καρκίνωμα του τραχήλου της μήτρας και ο επιπολασμός του σε δείγματα βιοψίας καρκίνου από διαφορετικές γεωγραφικές περιοχές
ΠΕΡΙΛΗΨΗ Το DNA από ένα δείγμα βιοψίας διηθητικού καρκίνου του τραχήλου της μήτρας περιείχε αλληλουχίες που υβριδοποιούνταν με το DNA του ιού των ανθρώπινων θηλωμάτων (HPV) τύπου 11 μόνο υπό μη αυστηρές συνθήκες. Το DNA αυτό κλωνοποιήθηκε μοριακά σε φάγο Α. Υπό αυστηρές συνθήκες υβριδισμού διασταυρώθηκε σε μικρό βαθμό (λιγότερο από 0,1%) με τους τύπους HPV 10, 14 και 15 και δεν παρουσίασε καμία ομολογία με DNA άλλων ανθρώπινων τύπων HPV. Ως εκ τούτου, προτείνουμε να τον ορίσουμε προσωρινά ως HPV 16. Το DNA του HPV 16 χρησιμοποιήθηκε ως ανιχνευτής για τον έλεγχο πρόσθετων δειγμάτων βιοψίας καρκίνου από καρκίνο του τραχήλου της μήτρας, του αιδοίου και του πέους, καθώς και καλοήθων κονδυλωμάτων των γεννητικών οργάνων (condylomata acuminata) και δυσπλασιών του τραχήλου της μήτρας για την παρουσία ομόλογων αλληλουχιών. Στο 61,1% (11/18) των δειγμάτων καρκίνου του τραχήλου της μήτρας από Γερμανίδες ασθενείς βρέθηκαν αλληλουχίες που υβριδοποιούνται με το DNA του HPV 16 σε συνθήκες υψηλής αυστηρότητας. Αντίθετα, μόνο το 34,8% (8/23) των δειγμάτων βιοψίας καρκίνου από την Κένυα και τη Βραζιλία αποκάλυψε αυτό το DNA. Σε δείγματα βιοψίας καρκίνου του αιδοίου και του πέους υβριδοποιήθηκε το 28,6% (2/7) ή το 25% (1/4), αντίστοιχα. Μόνο 2 από τα 33 condylomata acuminata περιείχαν HPV 16 DNA. Και οι δύο θετικοί όγκοι φιλοξενούσαν επιπλέον HPV 6 ή HPV 11 DNA. Τα δεδομένα υποδεικνύουν, επομένως, ότι το DNA του HPV 16 επικρατεί στους κακοήθεις όγκους, καθιστώντας μάλλον απίθανη μια τυχαία επιμόλυνση με DNA θηλωμάτων από παρακείμενα θηλώματα. Η σπάνια παρουσία σε καλοήθη θηλώματα των γεννητικών οργάνων εκτός από τους κοινούς θηλωματικούς ιούς των γεννητικών οργάνων υποδηλώνει την εξάρτηση του πολλαπλασιασμού του HPV 16 από βοηθητικούς ιούς.
Υπάρχουν όλο και περισσότερες ενδείξεις ότι οι papillomaviruses μπορεί να εμπλέκονται στην αιτιολογία ορισμένων καρκίνων στα ζώα και στον άνθρωπο (για ανασκόπηση βλ. παραπομπή 1). Αυτό εξηγεί τα καρκινώματα που προκαλούνται από τον θηλωματοϊό Shope στα κουνέλια, τα ινοσαρκώματα και τα καρκινώματα του οισοφάγου που προκαλούνται από θηλωματοϊούς των βοοειδών, τα οφθαλμικά καρκινώματα στα βοοειδή και τα δερματικά καρκινώματα στα πρόβατα, καθώς και τις κακοήθεις μετατροπές που παρατηρούνται στην epidermodysplasia verruciformis καθώς και περιστασιακά στην θηλωμάτωση του λάρυγγα. Είναι κοινό χαρακτηριστικό της κακοήθους μετατροπής μετά από λοίμωξη από θηλωματοϊούς ότι φαίνεται να απαιτείται πρόσθετη αλληλεπίδραση με τα εναρκτήρια γεγονότα (2).
Ο καρκίνος των ανθρώπινων γεννητικών οργάνων αποκαλύπτει επιδημιολογικά χαρακτηριστικά των μολυσματικών συμβάντων (3). Έχει διαπιστωθεί ότι δύο ομάδες ιών παίζουν ρόλο: οι ιοί του απλού έρπητα (4, 5) και οι ιοί των ανθρώπινων θηλωμάτων (HPV) (6, 7). Επειδή η ομάδα μας απέτυχε σταθερά να ανιχνεύσει DNA απλού έρπητα σε δείγματα βιοψίας καρκίνου του τραχήλου της μήτρας, αλλά παρείχε αποδείξεις για λειτουργίες που μοιάζουν με λειτουργίες εκκινητή αυτών των λοιμώξεων από ιούς (αναφορά 8- αδημοσίευτα δεδομένα), εστιάσαμε το ενδιαφέρον μας στην παραμονή του DNA των θηλωμάτων εντός των όγκων των γεννητικών οργάνων.
Δύο τύποι λοιμώξεων από ιούς θηλωμάτων των γεννητικών οργάνων έχουν καταδειχθεί τακτικά σε θηλώματα των γεννητικών οργάνων (ακανθώδη κονδυλώματα και άτυπα κονδυλώματα του τραχήλου της μήτρας): ο HPV 6 και ο HPV 11 (9-11). Ενδέχεται να υπάρχουν επιπλέον τύποι εντός των καλοήθων όγκων των γεννητικών οργάνων (12).
Πρόσφατα, τρεις ομάδες ανέφεραν την παρουσία DNA HPV σε ορισμένους όγκους των γεννητικών οργάνων: οι Green et al. (13) ανέφεραν ότι 2 από τα 31 καρκινώματα του τραχήλου της μήτρας και 2 από τα 10 καρκινώματα του αιδοίου περιείχαν αλληλουχίες που σχετίζονται με έναν ιό που πιθανώς αντιπροσωπεύει τον HPV 10. Οι Zachow et al. (14) ανέφεραν υβριδισμό DNA με το DNA του HPV 6 υπό αυστηρές συνθήκες σε δύο βλεννώδη καρκινώματα του αιδοίου και σε ένα καρκίνωμα in situ του αιδοίου. Υπό μη αυστηρές συνθήκες DNA από ένα επιπλέον βερυκώδες καρκίνωμα και τρία καρκινώματα in situ του αιδοίου υβριδοποιήθηκαν με DNA που χρησιμοποίησαν οι Green και συν (13) στη μελέτη τους. Οι Gissmann et al. (αναφ. 10 και 15- αδημοσίευτα δεδομένα) ανίχνευσαν DNA που διασταυρώθηκε με ή ταυτίστηκε με το DNA του HPV 6 ή του HPV 11 σε 6 όγκους Buschke-Lowenstein (μη μεταστατικά στυλοβακτηριδιακά καρκινώματα) και σε 5 από τα 27 δείγματα βιοψίας καρκίνου του τραχήλου της μήτρας (3 από αυτά αντιπροσώπευαν διηθητικό καρκίνο και 2 καρκινώματα in situ). Στην παρούσα μελέτη DNA που υβριδοποιήθηκε με τον HPV 11 υπό μη αυστηρές συνθήκες σε έναν από αυτούς τους όγκους κλωνοποιήθηκε μοριακά και χρησιμοποιήθηκε ως ανιχνευτής για τον έλεγχο καλοήθων και κακοήθων όγκων των γεννητικών οργάνων για την παρουσία ομόλογων αλληλουχιών. Τα δεδομένα αποκαλύπτουν μια εκπληκτική επικράτηση αυτού του DNA σε κακοήθεις όγκους και την πολύ περιστασιακή παρουσία του σε καλοήθη θηλώματα.
ΥΛΙΚΟ ΚΑΙ ΜΕΘΟΔΟΙ
Υβριδισμός κυτταρικού DNA με κηλίδες. Τα δείγματα βιοψίας ιστού διατηρήθηκαν κατεψυγμένα στους -20'C. Το DNA παρασκευάστηκε με εκχύλιση φαινόλης/χλωροφορμίου/ισοαμυλικής αλκοόλης όπως περιγράφεται (10). Περίπου 10 ug DNA όγκου διασπάστηκαν με τη χρήση διαφόρων περιοριστικών ενδονουκλεασών, διαχωρίστηκαν σε πηκτές αγαρόζης και μεταφέρθηκαν σε φίλτρα νιτροκυτταρίνης.
Ο υβριδισμός έγινε σε 0,75 M NaCl/0,075 M κιτρικό νάτριο και διάφορες συγκεντρώσεις φορμαμιδίου στους 420C (10) με tRNA αντί για DNA από θύμο μοσχαριού ως φορέα. Το επισημασμένο με 32P HPV DNA που ήταν κλωνοποιημένο στο πλασμίδιο pBR322 καθαρίστηκε από τον φορέα με ηλεκτροφόρηση πριν από τη νικ-μετάφραση. Τα φίλτρα πλύθηκαν σε 0,30 M NaCl/0,03 M κιτρικό νάτριο/0. 1% θειϊκό δωδεκυλικό νάτριο στην αντίστοιχη θερμοκρασία υβριδισμού. Για τον έλεγχο του DNA του όγκου, τα φίλτρα υβριδοποιήθηκαν σε συνθήκες χαμηλής αυστηρότητας (400C κάτω από τη θερμοκρασία τήξης, tm), διατηρήθηκαν υγρά πριν και κατά τη διάρκεια της έκθεσης, ξαναπλύθηκαν σε αυστηρές συνθήκες (200C κάτω από τη tm) και εκτέθηκαν εκ νέου.
Κλωνοποίηση του ιϊκού DNA. Το HPV-DNA από καρκίνωμα του τραχήλου της μήτρας (εργαστηριακός κωδικός WV 2916) κλωνοποιήθηκε στο βακτηριοφάγο A L 47 στη μονή θέση BamHI (11) και υποκλωνοποιήθηκε στο pBR322.
ΑΠΟΤΕΛΕΣΜΑΤΑ
Από τον έλεγχο μεγάλου αριθμού καρκινωμάτων του τραχήλου της μήτρας υπό μη αυστηρές συνθήκες υβριδισμού (αδημοσίευτα δεδομένα) με DNA HPV 11 (11), διαπιστώθηκε ότι ένας όγκος (WV 2916) φιλοξενούσε αλληλουχίες θηλωμάτων με ασυνήθιστο μοτίβο διάσπασης Pst I (Εικ. 1) που δεν ήταν ανιχνεύσιμες υπό αυστηρές συνθήκες. Περαιτέρω ανάλυση του DNA του WV 2916 (Εικ. 2) έδειξε μια κύρια ζώνη 7,2 ζευγών χιλιοβάσεων (kb) μετά τη διάσπαση με BamHI. Αυτό το θραύσμα μειώθηκε με τη διάσπαση με EcoRl και μετανάστευσε με το μεγαλύτερο μέρος του κυτταρικού DNA μετά τη διάσπαση με HindIII (βλέπε επίσης Εικ. 3).
Σε κάθε περίπτωση παρατηρήθηκαν πρόσθετες ζώνες διαφορετικού μήκους σε χαμηλότερες συγκεντρώσεις (Εικ. 2 Αριστερά, λωρίδες b-d). Η πλύση σε συνθήκες υψηλής αυστηρότητας (Εικ. 2 Δεξιά) αφαίρεσε σχεδόν όλα τα σήματα στο DNA του WV2916 σε σύγκριση με τους θετικούς ελέγχους (Εικ. 2, λωρίδες α, ε και στ). Η κατασκευή μιας γονιδιωματικής βιβλιοθήκης και η επακόλουθη διαλογή πλακών με επισημασμένο με 32P DNA HPV 11 σε μη αυστηρές συνθήκες οδήγησε σε έναν αριθμό ανασυνδυασμένων φάγων που περιείχαν το θραύσμα των 7,2 kb. Επιπλέον, αρκετές θετικές πλάκες υβριδισμού περιείχαν ένθετα DNA διαφόρων μηκών που αντιστοιχούσαν στα πρόσθετα θραύσματα που φαίνονται στο Σχήμα 2. Ο χαρακτηρισμός αυτού του DNA θα αναφερθεί αλλού.
Το θραύσμα των 7,2-kb υποκλωνοποιήθηκε στο pBR322 και χαρακτηρίστηκε με διάφορα ένζυμα περιορισμού (αδημοσίευτα στοιχεία). Ο υβριδισμός του DNA του WV 2916 με επισημασμένο DNA 7,2-kb υπό αυστηρές συνθήκες (Εικ. 3) οδήγησε σε μοτίβο παρόμοιο με αυτό που παρατηρήθηκε στην Εικ. 2. Ωστόσο, τα πρόσθετα θραύσματα δεν ανιχνεύθηκαν με αυτόν τον ανιχνευτή, υποδεικνύοντας έτσι την ετερογένεια των αλληλουχιών HPV σε αυτό το καρκίνωμα του τραχήλου της μήτρας.
Ο υβριδισμός με κηλίδα του θραύσματος των 7,2 kb με DNA από τύπους ιών των ανθρώπινων θηλωμάτων που έχουν μέχρι στιγμής χαρακτηριστεί υπό αυστηρές συνθήκες οδήγησε σε θετική αντίδραση μόνο με τους HPV 10, 14 και 15 (G. Orth, προσωπική επικοινωνία) και με ένα ακόμη μη ταξινομημένο απομονωμένο δείγμα από ασθενή με epidermodysplasia verruciformis (G. Orth, προσωπική επικοινωνία). Η έκταση του διασταυρούμενου υβριδισμού με αυτούς τους τύπους εκτιμήθηκε σε λιγότερο από 0,1%. Ως εκ τούτου, συνήχθη το συμπέρασμα ότι το θραύσμα 7,2-kb από το DNA του WV 2916 αντιπροσωπεύει έναν άλλο τύπο θηλωμαϊού, που προσωρινά ονομάστηκε HPV 16.
Το DNA HPV 16 που καθαρίστηκε από τον φορέα χρησιμοποιήθηκε ως ανιχνευτής για τον έλεγχο μιας σειράς κονδυλωμάτων, δυσπλασιών και καρκινωμάτων in situ των γεννητικών οργάνων, καθώς και καρκινωμάτων των γεννητικών οργάνων που αναπτύσσονται διηθητικά. Ο υβριδισμός σε χαμηλή αυστηρότητα ακολουθούμενος από επακόλουθη πλύση σε υψηλή αυστηρότητα μετά από μια πρώτη έκθεση επέτρεψε την ανίχνευση ειδικών για τον HPV 16 καθώς και πιο απομακρυσμένων αλληλουχιών θηλωματοϊών στο ίδιο πείραμα (Εικ. 4 και 5).
Όπως φαίνεται στον πίνακα 1, 11 από τα 18 καρκινώματα του τραχήλου της μήτρας από γερμανικές ασθενείς περιείχαν αλληλουχίες ειδικές για τον HPV 16 (Εικ. 4). Το DNA από έναν επιπλέον όγκο υβριδοποιήθηκε μόνο σε συνθήκες χαμηλής αυστηρότητας και το DNA από ένα άλλο δείγμα βιοψίας υβριδοποιήθηκε σε αυστηρές συνθήκες με ένα μείγμα DNA από HPV 8, 9, 10 και 11 DNA. Τα DNA από μόνο 8 από τα 23 δείγματα βιοψίας που ελήφθησαν από την Αφρική και τη Νότια Αμερική αντέδρασαν υπό αυστηρές συνθήκες με το DNA του HPV 16. Το υψηλότερο ποσοστό αρνητικών μη ευρωπαϊκών όγκων (65,2%) και τα υλικά που περιείχαν ανιχνεύσιμες συγκεντρώσεις διαφορετικών ιών θηλωμάτων (8,7%) υποδηλώνουν ότι άλλοι τύποι ιών ενδέχεται να επικρατούν στους όγκους από ασθενείς αυτών των περιοχών.
Ειδικές και συναφείς αλληλουχίες του HPV 16 βρέθηκαν επίσης σε ορισμένες δυσπλασίες και καρκινώματα in situ του τραχήλου της μήτρας καθώς και σε δύο καρκίνους του αιδοίου και έναν καρκίνο του πέους (βλ. Πίνακα 1). Ωστόσο, μόνο 2 από τα 33 (6,1%) κονδυλώματα των γεννητικών οργάνων περιείχαν HPV 16 DNA, όπως προσδιορίστηκε από το χαρακτηριστικό πρότυπο διάσπασης Pst I (Εικ. 5). Είναι ενδιαφέρον ότι αυτοί οι δύο όγκοι φιλοξενούσαν επίσης είτε HPV 6 είτε HPV 11 DNA.
ΣΥΖΗΤΗΣΗ
Ο χαρακτηρισμός των τύπων θηλωμάτων βασίζεται επί του παρόντος αποκλειστικά στην ανάλυση του DNA (16) μετά από μοριακή κλωνοποίηση. Πολλοί από τους ταξινομημένους τύπους έχουν ταυτοποιηθεί μόνο από DNA όγκων που φέρουν αυτά τα γονιδιώματα και δεν έχουν ακόμη αποδειχθεί σε σωματίδια θηλωμάτων (11). Ένας χαμηλός βαθμός ομολογίας βάσεων, ανιχνεύσιμος υπό συνθήκες υβριδισμού μειωμένης αυστηρότητας (17), μια παρόμοια γονιδιακή οργάνωση (18, 19) και μια μη ενσωματωμένη επεισοδιακή κατάσταση (9) χαρακτηρίζουν τις απομονώσεις που έχουν ληφθεί μέχρι στιγμής.
Παρόμοια χαρακτηριστικά αποκαλύπτονται από το DNA του ιού των θηλωμάτων που απομονώθηκε απευθείας από δείγμα βιοψίας ανθρώπινου διηθητικού καρκινώματος του τραχήλου της μήτρας. Αυτό το DNA υβριδοποιείται με τον HPV 6 ή τον HPV 11 σε μη αυστηρές συνθήκες και υβριδοποιείται σε πολύ χαμηλό βαθμό (λιγότερο από 0,1%) με τους HPV 10, 14, 15 και έναν μη ταξινομημένο ακόμη τύπο που απομονώθηκε από ασθενή με epidermodysplasia verruciformis (G. Orth, προσωπική επικοινωνία) σε υψηλές αυστηρές συνθήκες, ενώ δεν προέκυψε θετική αντίδραση με τους άλλους τύπους ιών σε αυτές τις συνθήκες. Η σύγκριση με το DNA του HPV 7 δεν ήταν δυνατή διότι δεν είναι ακόμη διαθέσιμο κλωνοποιημένο DNA αυτού του τύπου. Το γεγονός ότι µέχρι σήµερα το DNA αυτού του θηλωµαϊού έχει βρεθεί ότι εµφανίζεται αποκλειστικά σε κονδυλώµατα του χασάπη (20, 21) καθιστά την ταύτιση µε το DNA του θηλωµαϊού του τραχήλου της µήτρας µάλλον απίθανη. Συνεπώς, το απομονωμένο άτομο που περιγράφεται εδώ χαρακτηρίζεται προσωρινά ως HPV 16. Το DNA του HPV 16 υπάρχει σε εξωχρωμοσωμική κατάσταση στον όγκο (αδημοσίευτα δεδομένα). Τα κυκλικά μόρια, ωστόσο, φαίνεται να υπάρχουν σε πολυμερείς μορφές.
Η παρουσία αυτού του DNA σε περισσότερο από το 60% των δειγμάτων βιοψίας καρκίνου του τραχήλου της μήτρας από Γερμανίδες ασθενείς και η απουσία του από τα περισσότερα καλοήθη θηλώματα της ίδιας περιοχής αποτελεί μια εντυπωσιακή παρατήρηση. Αποκαλύπτει μια αξιοσημείωτη εξειδίκευση των λοιμώξεων από τον HPV 16 για κακοήθη ιστό. Αυτό καθιστά μάλλον απίθανη μια τυχαία μόλυνση από παρακείμενο ιστό θηλώματος. Η παρουσία αυτού του DNA σε 2 από τα 33 ακανθώδη κονδυλώματα, επιπλέον πολύ μεγαλύτερων ποσοτήτων είτε του HPV 6 είτε του HPV 11, θα μπορούσε να αποτελέσει ένδειξη για την ιδιόμορφη κατανομή του DNA του HPV 16. Αν και ο HPV 16 υπάρχει αποκλειστικά ως κυκλικό μόριο μονομερούς μήκους σε αυτές τις βλάβες (αδημοσίευτα δεδομένα), μπαίνει κανείς στον πειρασμό να υποθέσει ότι το DNA του HPV 16 είναι ελαττωματικό και απαιτεί συμπλήρωση από πρόσθετους τύπους θηλωμάτων για την ενθυλάκωση των μορίων και τη μολυσματικότητα. Αυτό βέβαια πρέπει να τεκμηριωθεί με περαιτέρω πειράματα.
Το DNA παρουσίασε κάποια ετερογένεια στον καρκινικό ιστό, γεγονός που υποδηλώνει είτε την ύπαρξη διαφόρων υποτύπων είτε γονιδιωματικές αναδιατάξεις κατά την ανάπτυξη του καρκίνου.
Φαίνεται να υπάρχει κάποια γεωγραφική διαφορά στη συχνότητα εμφάνισης των λοιμώξεων από τον HPV 16 στον καρκίνο των γεννητικών οργάνων του ανθρώπου. Μόνο το 34,8% των δειγμάτων βιοψίας καρκίνου του τραχήλου της μήτρας που ελήφθησαν από την Κένυα και τη Βραζιλία περιείχαν αλληλουχίες διασταυρούμενου υβριδισμού. Αυτό μπορεί να αντικατοπτρίζει τον επιπολασμό άλλων τύπων θηλωμάτων σε αυτές τις περιοχές. Πράγματι, τουλάχιστον τρεις πρόσθετοι τύποι έχουν καταδειχθεί σε δείγματα βιοψίας καρκίνου των γεννητικών οργάνων του ανθρώπου: Ο HPV 6 σε όγκους Buschke-Lowenstein ή σε βερικοειδή καρκινώματα του αιδοίου και του πέους (10, 14), DNA του ιού που πιθανώς ταυτίζεται με τον HPV 10 σε 2 από τους 31 καρκίνους του τραχήλου της μήτρας και σε 2 από τους 10 καρκίνους του αιδοίου (13) και DNA του HPV 11 σε λίγους καρκίνους του τραχήλου της μήτρας (15). Είναι επομένως προφανές ότι διαφορετικοί τύποι ιών θηλωμάτων μπορούν να βρεθούν σε πλακώδεις καρκινώματα των γεννητικών οργάνων. Αυτό υπογραμμίζεται περαιτέρω από την παρούσα μελέτη, η οποία αποκάλυψε πρόσθετους θετικούς όγκους με υβριδοποίηση υπό συνθήκες χαμηλής αυστηρότητας με άλλους τύπους HPV DNA. Επί του παρόντος, το συνολικό ποσοστό των θετικών δειγμάτων βιοψίας καρκίνου του τραχήλου της μήτρας (γερμανικά περιστατικά) ανέρχεται σε 72%. Αναμένουμε ότι ο χαρακτηρισμός περαιτέρω τύπων HPV θα αυξήσει το ποσοστό των θετικών όγκων.
Η τακτική παρουσία HPV-DNA σε δείγματα βιοψίας καρκίνου των γεννητικών οργάνων δεν αποδεικνύει από μόνη της αιτιολογική εμπλοκή αυτών των ιϊκών λοιμώξεων, αν και η προφανής καρκινική εξειδίκευση του HPV 16 υποδηλώνει έναν τέτοιο ρόλο. Η βιολογική τους σημασία καθώς και η προτεινόμενη αλληλεπίδραση με τα εναρκτήρια γεγονότα (2) απαιτούν ασφαλώς περαιτέρω διερεύνηση".
https://doi.org/10.1073/pnas.80.12.3812
--> ΣΥΝΟΠΤΙΚΑ:
Ο Harald Zur Hausen ξεκίνησε την αναζήτησή του αναζητώντας "ιούς" στα ανθρώπινα κονδυλώματα των γεννητικών οργάνων, οδηγώντας στην ανακάλυψη ενός νέου τύπου "ιού των θηλωμάτων", τον οποίο ονόμασε HPV-6
Προς μεγάλη απογοήτευσή του, η ομάδα του δεν μπόρεσε να βρει τον HPV-6 σε δείγματα καρκίνου του τραχήλου της μήτρας, αλλά τον οδήγησε σε έναν στενά συνδεδεμένο "θηλωμαϊό", που τελικά ονομάστηκε HPV-11
Το 1983 ο zur Hausen δημοσίευσε στοιχεία ότι ο HPV-11 ήταν παρών σε τρία από τα 24 δείγματα καρκίνου του τραχήλου της μήτρας που εξέτασε
Συνέχισε την έρευνά του και ανακάλυψε τον HPV-16, ο οποίος ανιχνεύθηκε περίπου στους μισούς καρκίνους του τραχήλου της μήτρας, και στη συνέχεια τον HPV-18, ο οποίος ήταν παρών σε περίπου ένα στα πέντε δείγματα καρκίνου του τραχήλου της μήτρας
Η ανακάλυψη προκάλεσε μεγάλη αναστάτωση εκείνη την εποχή - στις αρχές της δεκαετίας του 1980 - επειδή η πλειοψηφία των ειδικών δεν πίστευε ότι "ιοί" θα μπορούσαν να προκαλέσουν καρκίνο
Η ανακάλυψη αυτή του χάρισε το μισό από το βραβείο Νόμπελ Φυσιολογίας και Ιατρικής του 2008, το οποίο μοιράστηκε με 2 Γάλλους επιστήμονες που ανακάλυψαν τον "ιό" της ανθρώπινης ανοσοανεπάρκειας (HIV) (αυτό είναι ό,τι χρειάζεται να ξέρει κανείς).
Το βραβείο Νόμπελ ανέφερε ότι ο Dr. zur Hausen πήγε "ενάντια στο τρέχον δόγμα της εποχής" και η πρότασή του για τον ρόλο του HPV στον καρκίνο του τραχήλου της μήτρας ήταν αντίθετη με τις επικρατούσες απόψεις της δεκαετίας του 1970.
"Η πρότασή μου δεν ήταν πολύ ευπρόσδεκτη εκείνη την εποχή", υπενθύμισε ο Harald zur Hausen σε συνέντευξή του
Εκείνη την εποχή, πολλοί ερευνητές εστίαζαν την προσοχή τους στον "ιό" του απλού έρπητα
Χρειάστηκε αρκετός χρόνος για να συγκεντρωθούν στοιχεία που να υποστηρίζουν την πρόταση
Ο Harald zur Hausen υπέθεσε ότι τα καρκινικά κύτταρα, εάν περιείχαν έναν ογκογόνο "ιό", θα έπρεπε να έχουν ενσωματωμένο στο γονιδίωμά τους "ιικό" DNA
Χρειάστηκαν όμως περισσότερα από 10 χρόνια για να αποδειχθεί αυτό, επειδή η διαδικασία περιπλέκεται από το γεγονός ότι μόνο τμήματα του "ιϊκού" DNA ενσωματώνονταν στο γονιδίωμα του ξενιστή
Η ομάδα του βρήκε νέο HPV-DNA (δηλαδή όχι έναν "ιό" αλλά το υποτιθέμενο DNA του) σε βιοψίες καρκίνου του τραχήλου της μήτρας, "ανακαλύπτοντας" έτσι τον καρκινογόνο "ιό" τύπου HPV 16 το 1983
Ένα χρόνο αργότερα, η ομάδα κλωνοποίησε τους HPV 16 και HPV 18 από ασθενείς με καρκίνο του τραχήλου της μήτρας (πού καθαρίστηκαν και απομονώθηκαν ποτέ οι HPV 16 και 18;)
Οι HPV 16 και 18 έχουν βρεθεί σταθερά στο 70% περίπου των βιοψιών καρκίνου του τραχήλου της μήτρας σε όλο τον κόσμο (δηλαδή έχουν βρει DNA σε βιοψίες που υποτίθεται ότι είναι αλλά ποτέ δεν αποδείχθηκε ότι είναι "ιός")
Η επιτροπή Νόμπελ ήταν επιφυλακτική στις προβλέψεις της για τον αντίκτυπο που θα έχει το εμβόλιο, σχολιάζοντας ότι: "μπορεί να μειώσει την ανάγκη για χειρουργική επέμβαση και την παγκόσμια επιβάρυνση από τον καρκίνο του τραχήλου της μήτρας".
"Αυτή ήταν η πρώτη φορά που κατέστη δυνατό να οριστεί με σαφήνεια ένας μολυσματικός παράγοντας ως αιτία ενός καρκίνου, να καταδειχθεί η διαδικασία με την οποία το ιϊκό DNA επηρεάζει την ανάπτυξη του καρκίνου και, τέλος, πώς ένα εμβόλιο θα μπορούσε ενδεχομένως να αποτρέψει την ανάπτυξη του καρκίνου", σχολίασε ο Dr. Markman
Η ιδέα ήταν τόσο επαναστατική που χρειάστηκε αρκετός χρόνος για να γίνει αποδεκτό το εύρημα από την επιστημονική κοινότητα
Πολλοί ειδικοί δεν μπορούσαν να πιστέψουν ότι ένας "ιός" θα μπορούσε να προκαλέσει καρκίνο και επικεντρώνονταν αντ' αυτού σε άλλους περιβαλλοντικούς παράγοντες και γενετικές προδιαθέσεις
"Χρειάστηκαν άλλα 10 χρόνια μέχρι να σωπάσει η πλειοψηφία των σκεπτικιστών, και ακόμη και πριν από λίγα χρόνια, υπήρχαν ακόμη μερικοί ανυποχώρητοι παλαιότεροι γιατροί και επιστήμονες". ("αποσιωπήθηκε" δεν σημαίνει ότι αποδείχθηκε λάθος)
Μια δημοσίευση του 1949 από τους Maurice Strauss, Henry Bunting και Joseph Melnick ανέφερε την παρατήρηση με το ηλεκτρονικό μικροσκόπιο σωμάτων που έμοιαζαν με "ιούς" και προέρχονταν από θηλώματα του δέρματος.
Πέντε τέτοιες βλάβες μελετήθηκαν με ηλεκτρονικό μικροσκόπιο
Το ήμισυ κάθε βλάβης στερεώθηκε σε φορμόλη για τομές ιστού, ενώ το υπόλοιπο αλέστηκε αμέσως με αλούντο και απεσταγμένο νερό και υποβλήθηκε σε διαυγαστική φυγοκέντρηση του υπερκείμενου υγρού στις 2.000 στροφές ανά λεπτό για 5 λεπτά και στη συνέχεια σε φυγοκέντρηση του προκύπτοντος υπερκείμενου υγρού στις 6.000 στροφές ανά λεπτό για 15 έως 45 λεπτά
Αυτά σκιαγραφήθηκαν με χρώμιο υπό γωνία 1:7.
Οι ρυθμίσεις που προέκυψαν έμοιαζαν με εκείνες που είχαν παρατηρηθεί προηγουμένως για κρυσταλλικούς φυτικούς "ιούς"
Η έρευνα στο συσσωρευμένο υλικό του εργαστηρίου χειρουργικής παθολογίας του νοσοκομείου New Haven αποκάλυψε άλλες 31 δερματικές αλλοιώσεις ιστολογικά παρόμοιες με εκείνες των θηλωμάτων με εγκλεισμό σώματος που περιγράφονται παραπάνω
Κατέληξαν στο συμπέρασμα ότι σωματίδια που μοιάζουν με "ιούς" και τείνουν να είναι διατεταγμένα σε κρυσταλλική διάταξη παρατηρήθηκαν με ηλεκτρονικό μικροσκόπιο σε μελέτη εναιωρημάτων 5 δερματικών θηλωμάτων
Στην εργασία τους του 1953, οι Maurice Strauss, Henry Bunting και Joseph Melnick αναφέρουν ότι η εργασία τους για τα ανθρώπινα θηλώματα πραγματοποιήθηκε με συμβατικό τρόπο, δηλαδή απομόνωση κυτταρικών συστατικών (δηλαδή όχι "ιών") με διαφορική φυγοκέντρηση και εξέτασή τους στο ηλεκτρονικό μικροσκόπιο.
Και πάλι βλέπουμε ότι το υλικό από τα θηλώματα και από τα δείγματα ελέγχου αλέθεται με alundum και απεσταγμένο νερό, φυγοκεντρείται στις 2.000 σ.α.λ. για πέντε λεπτά και το υπερκείμενο υγρό που προκύπτει υποβάλλεται σε περαιτέρω φυγοκέντρηση στις 6.000 σ.α.λ. για 45 λεπτά
Το ίζημα επαναιωρείται σε μικρό όγκο απεσταγμένου νερού (περίπου 1 ml).
Για την ηλεκτρονική μικροσκοπία μια μικρή σταγόνα τοποθετείται σε οθόνη κολλοδίου και σκιαγραφείται με χρώμιο ή παλλάδιο πριν από την εξέταση.
Αν και μεμονωμένα σωματίδια μπορούν να βρεθούν σε όλα τα δείγματα, τα σωματίδια είναι τοποθετημένα σε κρυσταλλοειδείς συστάδες με τέτοια κανονικότητα που η διάταξη αυτή φάνηκε να είναι χαρακτηριστική
(Με άλλα λόγια, δεν επρόκειτο για καθαρισμένα/απομονωμένα δείγματα που εξέταζαν)
Η ιστολογική εμφάνιση των θηλωμάτων που αποδίδουν σωματίδια που μοιάζουν με "ιούς" περιγράφηκε λεπτομερώς σε μια εργασία των Bunting και Strauss
Η απόλυτη ταυτοποίηση των ενδοπυρηνικών σωμάτων εγκλεισμού στα παρασκευάσματα Feulgen, για να αποφευχθεί η σύγχυση με μάζες χρωματίνης, εξασφαλίστηκε με σύγκριση με σχέδια και kodachromes των ίδιων κυττάρων όταν προηγουμένως είχαν χρωματιστεί με αιματοξυλίνη και ηωσίνη
(Εάν υπήρχε πιθανότητα σύγχυσης µε µάζες χρωµατίνης, αυτό αποτελεί περαιτέρω απόδειξη ότι το δείγµα περιείχε περισσότερα υλικά από τα υποτιθέµενα σωµατίδια "ιού".)
Οι φωτομικρογραφίες λήφθηκαν σε μήκη κύματος 2650 και 2800 k και αξιολογήθηκαν οπτικά
Πίστευαν ότι αυτό το χαρακτηριστικό σωματίδιο ήταν πιθανότατα "ιός" στη φύση και υπεύθυνο για την εμφάνιση και την ανάπτυξη της κονδυλώματος
Ισχυρίζονται ότι στο παρελθόν έχουν βρεθεί σφαιρικοί "ιοί" που δίνουν τέτοια κρυσταλλικά μοτίβα (μόνο που η ίδια έλλειψη καθαρισμού, απομόνωσης και απόδειξης της παθογένειας μπορεί να εφαρμοστεί και σε αυτά τα σωματίδια)
Το γεγονός ότι σχετικά ακάθαρτα παρασκευάσματα εναιωρημάτων αυτών των κονδυλωμάτων δίνουν τέτοια μοτίβα υποδεικνύει τον αξιοσημείωτο βαθμό προσβολής που έχουν αυτά τα σωματίδια μεταξύ τους και την ομοιομορφία τους (δηλ. περαιτέρω παραδοχή ότι τα σωματίδια που αντιπροσωπεύουν τον ιό HPV επιλέχθηκαν από μη καθαρισμένη πηγή)
Οι χαρακτηριστικές ιστοπαθολογικές μεταβολές που παρατηρήθηκαν σε αυτές τις βλάβες, που δεν παρατηρούνται σε κάθε κοινή κονδυλωμάτωση, προφανώς σχετίζονταν με την παρουσία των σωματιδίων που μοιάζουν με "ιούς"
Το ηωσινόφιλο ενδοπυρηνικό σώμα εγκλεισμού ήταν πιθανώς ενδεικτικό της παρουσίας του "ιού"
(Η μελέτη αυτή ισοδυναμεί με το ότι οι τρεις ερευνητές επιλέγουν ένα αντιπροσωπευτικό σωματίδιο από ακάθαρτες πηγές και αποδίδουν ιστολογικά αποτελέσματα στα σωματίδια χωρίς απόδειξη)
Το DNA από ένα δείγμα βιοψίας διηθητικού καρκίνου του τραχήλου της μήτρας περιείχε αλληλουχίες που υβριδοποιούνταν με το DNA του ιού των ανθρώπινων θηλωμάτων (HPV) τύπου 11 μόνο υπό μη αυστηρές συνθήκες
Υπό αυστηρές συνθήκες υβριδισμού διασταυρώθηκε σε μικρό βαθμό (λιγότερο από 0,1%) με τους τύπους HPV 10, 14 και 15 και δεν παρουσίασε καμία ομολογία με το DNA άλλων ανθρώπινων τύπων HPV
Το DNA του HPV 16 χρησιμοποιήθηκε ως ανιχνευτής για τον έλεγχο πρόσθετων δειγμάτων βιοψίας καρκίνου
Μόνο 2 από τα 33 condylomata acuminata περιείχαν HPV 16 DNA
Και οι δύο θετικοί όγκοι έφεραν επιπλέον DNA HPV 6 ή HPV 11
Τα δεδομένα υποδεικνύουν, επομένως, ότι το DNA του HPV 16 επικρατεί στους κακοήθεις όγκους, καθιστώντας μάλλον απίθανη μια τυχαία επιμόλυνση με DNA θηλωμάτων από γειτονικά θηλώματα (δηλαδή όχι ένα καθαρισμένο δείγμα)
Η σπάνια παρουσία σε καλοήθη θηλώματα των γεννητικών οργάνων (δηλ. μη γεννητικά) εκτός από τους κοινούς θηλωματοϊούς των γεννητικών οργάνων υποδηλώνει την εξάρτηση του πολλαπλασιασμού του HPV 16 από βοηθητικό "ιό".
Ο Zur Hausen υποστήριξε ότι υπάρχουν ολοένα και περισσότερες ενδείξεις ότι οι "papillomaviruses" μπορεί να εμπλέκονται στην αιτιολογία ορισμένων μορφών καρκίνου σε ζώα και ανθρώπους.
Είναι κοινό χαρακτηριστικό της κακοήθους μετατροπής μετά από μόλυνση από "θηλωματώδεις ιούς" ότι φαίνεται να απαιτείται πρόσθετη αλληλεπίδραση με τα γεγονότα έναρξης
Δύο ομάδες "ιών" λέγεται ότι έχουν βρεθεί να παίζουν ρόλο στον καρκίνο: οι "ιοί" του απλού έρπητα και οι ανθρώπινοι "papillomaviruses" (HPV)
Η οµάδα του Zur Hausen απέτυχε σταθερά να ανιχνεύσει DNA απλού έρπητα σε δείγµατα βιοψίας καρκίνου του τραχήλου της µήτρας (ίσως επειδή ποτέ δεν αποδείχθηκε ότι το DNA προέρχεται από καθαρισµένο/αποµονωµένο "ιό" απλού έρπητα;)
Έτσι, εστίασαν το ενδιαφέρον τους στην επιμονή του DNA του "ιού των θηλωμάτων" (επίσης ποτέ δεν αποδείχθηκε ότι προέρχεται από καθαρισμένα/απομονωμένα σωματίδια "ιού") εντός των όγκων των γεννητικών οργάνων
Ενδέχεται να υπάρχουν πρόσθετοι τύποι HPV μέσα σε καλοήθεις όγκους των γεννητικών οργάνων
Οι Green et al. ανέφεραν ότι 2 από τα 31 καρκινώματα του τραχήλου της μήτρας και 2 από τα 10 καρκινώματα του αιδοίου περιείχαν αλληλουχίες που σχετίζονται με έναν "ιό" που πιθανώς αντιπροσωπεύει τον HPV 10
Οι Gissmann et al. ανίχνευσαν DNA που αντιδρά διασταυρούμενο ή πανομοιότυπο με το DNA του HPV 6 ή του HPV 11 σε 6 όγκους Buschke-Lowenstein (μη μεταστασιάζοντα σπονδυλωτά καρκινώματα) και σε 5 από τα 27 δείγματα βιοψίας καρκίνου του τραχήλου της μήτρας
Ο Zur Hausen δήλωσε ότι στη μελέτη του, το DNA που υβριδοποιήθηκε με τον HPV 11 υπό μη αυστηρές συνθήκες σε έναν από αυτούς τους όγκους κλωνοποιήθηκε μοριακά και χρησιμοποιήθηκε ως ανιχνευτής για τον έλεγχο καλοήθων και κακοήθων όγκων των γεννητικών οργάνων για την παρουσία ομόλογων αλληλουχιών
Τα δεδομένα αποκαλύπτουν μια εκπληκτική επικράτηση αυτού του DNA σε κακοήθεις όγκους και την πολύ περιστασιακή παρουσία του σε καλοήθη θηλώματα (δηλαδή το DNA βρέθηκε και σε μη καρκινικούς όγκους)
Το DNA παρασκευάστηκε με εκχύλιση φαινόλης/χλωροφορμίου/ισοαμυλικής αλκοόλης όπως περιγράφεται
Περίπου 10 ug DNA όγκου διασπάστηκαν με τη χρήση διαφόρων περιοριστικών ενδονουκλεασών, διαχωρίστηκαν σε πηκτές αγαρόζης και μεταφέρθηκαν σε φίλτρα νιτροκυτταρίνης
Ο υβριδισμός έγινε σε 0,75 M NaCl/0,075 M κιτρικό νάτριο και διάφορες συγκεντρώσεις φορμαμιδίου στους 420C (10) με tRNA αντί για DNA από θύμο μοσχαριού ως φορέα
Το επισημασμένο με 32P HPV DNA που είναι κλωνοποιημένο στο πλασμίδιο pBR322 καθαρίστηκε από τον φορέα με ηλεκτροφόρηση πριν από τη νικ-μετάφραση
Τα φίλτρα πλύθηκαν σε 0,30 M NaCl/0,03 M κιτρικό νάτριο/0. 1% θειϊκό δωδεκυλικό νάτριο στην αντίστοιχη θερμοκρασία υβριδισμού
Το HPV-DNA από καρκίνωμα του τραχήλου της μήτρας (εργαστηριακός κωδικός WV 2916) κλωνοποιήθηκε στο βακτηριοφάγο A L 47 στη μονή θέση BamHI (11) και υποκλωνοποιήθηκε στο pBR322 (κοινώς χρησιμοποιούμενος πλασμιδιακός φορέας κλωνοποίησης σε E. coli)
Με τον έλεγχο μεγάλου αριθμού καρκινωμάτων του τραχήλου της μήτρας υπό μη αυστηρές συνθήκες υβριδισμού (αδημοσίευτα στοιχεία) με DNA HPV 11 (11), βρέθηκε ότι ένας όγκος (WV 2916) έφερε αλληλουχίες θηλωμάτων με ασυνήθιστο μοτίβο διάσπασης Pst I που δεν ήταν ανιχνεύσιμο υπό αυστηρές συνθήκες
Η κατασκευή μιας γονιδιωματικής βιβλιοθήκης και ο επακόλουθος έλεγχος των πλακών με επισημασμένο με 32Ρ DNA HPV 11 υπό μη αυστηρές συνθήκες οδήγησε σε έναν αριθμό ανασυνδυασμένων (διάφορες πηγές συνδυασμένου DNA) φάγων που περιείχαν το θραύσμα των 7,2 kb.
Παρενθετική σημείωση: Τα μόρια ανασυνδυασμένου DNA (rDNA) είναι μόρια DNA που σχηματίζονται με εργαστηριακές μεθόδους γενετικού ανασυνδυασμού (όπως η μοριακή κλωνοποίηση), οι οποίες συγκεντρώνουν γενετικό υλικό από πολλαπλές πηγές, δημιουργώντας αλληλουχίες που διαφορετικά δεν θα υπήρχαν στο γονιδίωμα.
Ο χαρακτηρισμός αυτού του DNA δεν αναφέρθηκε στην παρούσα εργασία.
Το θραύσμα των 7,2-kb υποκλωνοποιήθηκε στο pBR322 και χαρακτηρίστηκε με διαφορετικά ένζυμα περιορισμού (αδημοσίευτα στοιχεία).
Τα πρόσθετα θραύσματα δεν ανιχνεύθηκαν με αυτόν τον ανιχνευτή, υποδεικνύοντας έτσι την ετερογένεια (δηλ. όχι την ίδια) των αλληλουχιών HPV σε αυτό το καρκίνωμα του τραχήλου της μήτρας
Ο υβριδισμός του θραύσματος των 7,2-kb με DNA από τύπους ανθρώπινων "θηλωμάτων" που έχουν μέχρι στιγμής χαρακτηριστεί υπό αυστηρές συνθήκες οδήγησε σε θετική αντίδραση μόνο με τους HPV 10, 14 και 15 (G. Orth, προσωπική επικοινωνία) και ένα ακόμη αταξινόμητο απομονωμένο είδος από ασθενή με epidermodysplasia verruciformis (G. Orth, προσωπική επικοινωνία) (με άλλα λόγια, και πάλι αδημοσίευτα δεδομένα)
Ως εκ τούτου, συνήχθη το συμπέρασμα ότι το θραύσμα των 7,2-kb από το DNA του WV 2916 αντιπροσωπεύει έναν άλλο τύπο "ιού θηλωμάτων", που προσωρινά ονομάστηκε HPV 16
Το DNA του HPV 16 που καθαρίστηκε από τον φορέα χρησιμοποιήθηκε ως ανιχνευτής για τον έλεγχο μιας σειράς κονδυλωμάτων, δυσπλασιών και καρκινωμάτων in situ των γεννητικών οργάνων, καθώς και επιθετικά αναπτυσσόμενων καρκινωμάτων των γεννητικών οργάνων
(Με άλλα λόγια, χρησιμοποίησαν μια άγνωστη αλληλουχία DNA που δημιούργησαν και υπέθεσαν ότι ήταν ένας νέος HPV για να ελέγξουν δείγματα καρκίνου)
11 από τα 18 καρκινώματα του τραχήλου της μήτρας από Γερμανούς ασθενείς περιείχαν ειδικές αλληλουχίες HPV 16
Τα DNA από μόνο 8 από τα 23 δείγματα βιοψίας που ελήφθησαν από την Αφρική και τη Νότια Αμερική αντέδρασαν υπό αυστηρές συνθήκες με το DNA του HPV 16
Το υψηλότερο ποσοστό αρνητικών μη ευρωπαϊκών όγκων (65,2%) και εκείνων των υλικών που περιέχουν ανιχνεύσιμες συγκεντρώσεις διαφορετικών ιών θηλωμάτων (8,7%) υποδηλώνουν ότι άλλοι τύποι "ιών" μπορεί να επικρατούν σε όγκους ασθενών από αυτές τις περιοχές.
Μόνο 2 από τα 33 (6,1%) κονδυλώματα των γεννητικών οργάνων περιείχαν DNA HPV 16, όπως προσδιορίζεται από το χαρακτηριστικό πρότυπο διάσπασης Pst I
Είναι ενδιαφέρον ότι αυτοί οι δύο όγκοι φιλοξενούσαν επίσης DNA HPV 6 ή HPV 11
Ο χαρακτηρισμός των τύπων "θηλωμάτων" βασίστηκε αποκλειστικά στην ανάλυση του DNA μετά από μοριακή κλωνοποίηση
Πολλοί από τους ταξινομημένους τύπους είχαν ταυτοποιηθεί μόνο από DNA όγκων που έφεραν αυτά τα γονιδιώματα και δεν είχαν ακόμη αποδειχθεί σε σωματίδια "θηλωμάτων"
(Με άλλα λόγια, όλα όσα σχετίζονται με τον HPV βασίζονται σε τυχαίο DNA που δεν μπορεί να συνδεθεί με σωματίδια "ιού")
Το DNA του HPV 16 υπάρχει σε εξωχρωμοσωμική κατάσταση στον όγκο (αδημοσίευτα στοιχεία)
Ο Zur Hausen δήλωσε ότι η παρουσία αυτού του DNA σε περισσότερο από το 60% (δηλαδή όχι σε όλες τις περιπτώσεις) των δειγμάτων βιοψίας καρκίνου του τραχήλου της μήτρας από Γερμανίδες ασθενείς και η απουσία του από τα περισσότερα καλοήθη θηλώματα (δηλαδή βρίσκεται σε μη καρκινικές περιπτώσεις) από την ίδια περιοχή ήταν μια εκπληκτική παρατήρηση
Αυτό καθιστά μάλλον απίθανη μια τυχαία επιμόλυνση από παρακείμενο ιστό θηλώματος (και πάλι μη καθαρισμένο)
Αν και ο HPV 16 υπάρχει αποκλειστικά ως κυκλικό μόριο μονομερούς μήκους σε αυτές τις βλάβες (αδημοσίευτα δεδομένα), μπαίνει κανείς στον πειρασμό να υποθέσει ότι το DNA του HPV 16 είναι ελαττωματικό και απαιτεί συμπλήρωση από πρόσθετους τύπους "θηλωμάτων" για την ενθυλάκωση των μορίων και τη μολυσματικότητα
Το DNA παρουσίασε κάποια ετερογένεια (δηλαδή δεν ήταν το ίδιο) σε καρκινικό ιστό, γεγονός που υποδηλώνει είτε την ύπαρξη διαφόρων υποτύπων είτε γονιδιωματικές αναδιατάξεις κατά την ανάπτυξη του καρκίνου
Ο Zur Hausen παραδέχτηκε ότι υπήρχε κάποια γεωγραφική διαφορά στη συχνότητα των λοιμώξεων από τον HPV 16 στον καρκίνο των ανθρώπινων γεννητικών οργάνων, καθώς μόνο το 34,8% των δειγμάτων βιοψίας καρκίνου του τραχήλου της μήτρας που ελήφθησαν από την Κένυα και τη Βραζιλία περιείχαν αλληλουχίες διασταυρούμενης υβριδοποίησης
Δήλωσε ότι αυτό μπορεί να αντικατοπτρίζει την επικράτηση άλλων τύπων "θηλωμάτων" στις περιοχές αυτές:
HPV 6 σε όγκους Buschke-Lowenstein ή σε βερυκοειδή καρκινώματα του αιδοίου και του πέους
DNA του "ιού" πιθανώς ταυτόσημο με τον HPV 10 σε 2 από τους 31 καρκίνους του τραχήλου της μήτρας και σε 2 από τους 10 καρκίνους του αιδοίου
HPV 11 DNA σε λίγους καρκίνους του τραχήλου της μήτρας
Το συνολικό ποσοστό θετικών δειγμάτων βιοψίας καρκίνου του τραχήλου της μήτρας (γερμανικές περιπτώσεις) ανήλθε σε 72% (σύνολο όλων των HPV που ανιχνεύθηκαν, όχι μόνο του HPV 16)
Αναμένεται ότι ο χαρακτηρισμός περαιτέρω τύπων HPV θα αυξήσει το ποσοστό των θετικών όγκων
Ο Zur Hausen κατέληξε στο συμπέρασμα ότι η τακτική παρουσία HPV-DNA σε δείγματα βιοψίας καρκίνου των γεννητικών οργάνων δεν αποδεικνύει από μόνη της αιτιολογική εμπλοκή αυτών των λοιμώξεων από "ιούς", αν και η προφανής καρκινική εξειδίκευση του HPV 16 υποδηλώνει έναν τέτοιο ρόλο
Δήλωσε ότι η βιολογική τους σημασία καθώς και η προτεινόμενη αλληλεπίδραση με τα εναρκτήρια γεγονότα απαιτούν ασφαλώς περαιτέρω διερεύνηση
Η εργασία του Zur Hausen είναι ένας μικρόκοσμος του τι δεν πάει καλά με την ιολογία. Υπέθεσε ότι ένας "ιός" μπορεί να προκαλέσει καρκίνο του τραχήλου της μήτρας. Υπέθεσε ότι ήταν ο HPV. Παρόλο που το DNA που βρήκε διασταυρωνόταν με τους HPV 10, 14 και 15 σε ποσοστό μικρότερο από 0,1% και δεν είχε καμία ομοιότητα με οποιονδήποτε άλλο HPV, υπέθεσε ότι είχε ανακαλύψει τον HPV-16. Όταν χρησιμοποίησε το DNA του HPV-16 για να αναζητήσει αποδείξεις, μπόρεσε να το βρει μόνο σε ορισμένες (όχι σε όλες) περιπτώσεις καρκίνου του τραχήλου της μήτρας, οι οποίες διέφεραν έντονα ανάλογα με τη γεωγραφική τοποθεσία, και παρόλα αυτά εξακολουθούσε να υποθέτει ότι ήταν η αιτία του καρκίνου.
Όταν ο ερευνητής που υποθέτει όλα αυτά τα πράγματα ως αληθινά, στη συνέχεια παραδέχεται στην ίδια του την εργασία ότι:
Ο χαρακτηρισμός των τύπων του "ιού των θηλωμάτων" βασίστηκε αποκλειστικά στην ανάλυση του DNA μετά από μοριακή κλωνοποίηση
Πολλοί από τους ταξινομημένους τύπους είχαν ταυτοποιηθεί μόνο από DNA όγκων που έφεραν αυτά τα γονιδιώματα και δεν είχαν ακόμη αποδειχθεί σε σωματίδια "θηλωμάτων"
Η εύρεση του DNA που λέγεται ότι σχετίζεται με τον HPV δεν αποδεικνύει ότι ο HPV προκαλεί τον καρκίνο με τον οποίο έχει συσχετιστεί
Απαιτήθηκε περαιτέρω διερεύνηση της βιολογικής σημασίας καθώς και της προτεινόμενης αλληλεπίδρασης με τα εναρκτήρια γεγονότα
Υπάρχουν μερικά αρκετά μεγάλα προβλήματα με τα εν λόγω αποδεικτικά στοιχεία.
Το μόνο που μπορεί να υποστηριχθεί είναι η ταυτοποίηση τυχαίου DNA που θεωρείται ότι είναι "ιογενές" χωρίς να υπάρχουν καθαρισμένα και απομονωμένα φυσικά σωματίδια που να το υποστηρίζουν. Ίσως αυτός είναι ο λόγος για τον οποίο οι σύγχρονοι του Harald Zur Hausen ήταν επιφυλακτικοί απέναντι στα ευρήματά του και στη σχέση μεταξύ καρκίνου και "ιών". Δηλαδή, μέχρι που σιώπησαν.
------------------
Δικτυογραφία :
Does HPV Cause Cervical Cancer? – ViroLIEgy
https://viroliegy.com/2022/04/12/does-hpv-cause-cervical-cancer/
Αναρτήσεις
Δεν υπάρχουν σχόλια:
Δημοσίευση σχολίου
ΠΕΣ ΤΗΝ ΑΠΟΨΗ ΣΟΥ ΧΩΡΙΣ ΥΒΡΕΙΣ. Παρατηρούμε ακραίες τοποθετήσεις αναγνωστών. ΠΑΡΑΚΛΗΣΗ δεν θέλουμε να μπαίνουμε στη δύσκολη θέση να μην βάζουμε ΟΛΑ τα σχόλια. Δόξα στο Θεό η Ελληνική γλώσα είναι πλούσια ωστε να μην χρειάζονται ακραίες εκφράσεις.