"Η απομόνωση και ο καθαρισμός ενός ιού είναι απαραίτητα πριν από την παρασκευή εμβολίου"...
 |
Η παραπάνω δήλωση προέρχεται από τη νεκρολογία των New York Times για τον Wendell Meredith Stanley, ο οποίος θεωρείται από ορισμένους ως ο "πατέρας της ιολογίας". Αν και τεχνικά είναι μια σωστή δήλωση, στην πραγματικότητα θα έπρεπε να γράφει:
Η απομόνωση και ο καθαρισμός των σωματιδίων που πιστεύεται ότι είναι "ιός" είναι απαραίτητα προτού κάποιος ισχυριστεί ότι ανακάλυψε έναν "ιό".
Ο καθαρισμός και η απομόνωση των σωματιδίων που θεωρούνται "ιοί" είναι τα πρώτα βήματα που πρέπει να πραγματοποιηθούν προκειμένου να προσπαθήσει κανείς να ισχυριστεί την ανακάλυψη ενός νέου "ιού". Είναι απαραίτητα και δεν μπορούν να παραλειφθούν. Δυστυχώς, ενώ είναι παραδεκτό ότι αυτά τα βήματα είναι σημαντικά, οι ιολόγοι έχουν διαστρεβλώσει τη σημασία αυτών των λέξεων και δεν παρέχουν ποτέ αποδείξεις ότι αυτά τα βήματα έχουν ικανοποιηθεί σωστά.
Τι ακριβώς εννοείται λοιπόν με τον καθαρισμό και την απομόνωση; Ας δούμε τους κοινούς ορισμούς για αυτές τις αρκετά απλές έννοιες που η ιολογία φαίνεται ότι δεν είναι σε θέση να κατανοήσει:
--> ΚΑΘΑΡΙΣΜΟΣ:
καθαρίζω, απαλλάσσομαι από οτιδήποτε υποβαθμίζει, μολύνει, νοθεύει ή μολύνει:
να απαλλαγείτε από ξένα, ξένα ή ενοχλητικά στοιχεία:
https://www.dictionary.com/browse/purification
--> ΑΠΟΜΟΝΩΣΗ:
η πράξη του διαχωρισμού κάποιου πράγματος από άλλα πράγματα : η πράξη της απομόνωσης κάποιου πράγματος
https://www.merriam-webster.com/dictionary/isolation
Για μια πιο εμπεριστατωμένη ανάλυση των διαδικασιών που χρησιμοποιούνται για την απόπειρα καθαρισμού, ανατρέξτε σε αυτήν την ανάρτηση:
Is Complete Purification/Isolation of a "Virus" Even Possible?
Για να ισχυριστεί κανείς ότι έχει ανακαλυφθεί ένας "ιός", πρέπει πρώτα να αποδειχθεί ότι τα σωματίδια έχουν καθαριστεί και απομονωθεί απευθείας από έναν άρρωστο ασθενή. Τα σωματίδια αυτά πρέπει να είναι απαλλαγμένα από ξένα στοιχεία καθώς και από οτιδήποτε μπορεί να τα μολύνει, να τα νοθεύσει ή να τα μολύνει (δηλαδή να καθαριστούν) και πρέπει να διαχωριστούν επίσης από οτιδήποτε άλλο βρίσκεται μέσα στο δείγμα (δηλαδή να απομονωθούν). Αυτός είναι ο μόνος τρόπος με τον οποίο ένας ερευνητής θα μπορούσε να αποδείξει ότι τα υποτιθέμενα σωματίδια του "ιού" υπάρχουν, αν έπαιρνε εικόνες Ηλεκτρονικού Μικροσκοπίου (ΗΜ) μόνο αυτών των σωματιδίων χωρίς να υπάρχει τίποτε άλλο. Στη συνέχεια, θα μπορούσαν να χρησιμοποιήσουν μόνο αυτά τα σωματίδια για να προσπαθήσουν να αποδείξουν την παθογένεια σε μελέτες σε ζώα. Τα σωματίδια θα μπορούσαν στη συνέχεια να χαρακτηριστούν και να περιγραφούν βιοχημικά. Μόνο τότε θα υπήρχε νόμιμος ισχυρισμός για την ανακάλυψη ενός "ιού", καθώς θα υπήρχαν άμεσες φυσικές αποδείξεις σωματιδίων που μπορούν να αποδειχθούν ότι προκαλούν την ασθένεια με την οποία σχετίζονται. Δυστυχώς, αυτή η διαδικασία δεν γίνεται ποτέ.
Στην περίπτωση του "ιού" της γρίπης (τόσο του Α όσο και του Β), ήταν προφανές ότι δεν υπήρξε κανενός είδους καθαρισμός ούτε απομόνωση, παρόλο που οι ερευνητές ισχυρίστηκαν (τουλάχιστον όσον αφορά την απομόνωση) ότι αυτό είχε γίνει. Μη καθαρισμένα πλυσίματα λαιμού από άρρωστους ανθρώπους που υποτίθεται ότι περιείχαν έναν "ιό" αναμίχθηκαν με πρόσθετα και χορηγήθηκαν σε κουνάβια μέχρι να αρρωστήσουν. Μόλις συνέβαινε αυτό, οι ιστοί του κουνάβιου (συνήθως πνεύμονες και ρινικοί σάλπιγγες) αλέθονταν, αναμειγνύονταν με πρόσθετα και εγχύονταν σε άλλα κουνάβια. Αυτή η διαδικασία μεταφέρθηκε τελικά από τα κουνάβια στα ποντίκια και θεωρήθηκε ότι ένας "ιός" μεταδίδεται από ζώο σε ζώο. Αυτή η διαδικασία δεν έλαβε ποτέ υπόψη της τα δισεκατομμύρια ξένα σωματίδια (ανθρώπινο/ζωικό DNA, χημικές ουσίες, άλλα κυτταρικά συστατικά, κ.λπ.) που θα περιέχονταν στα ενεθέντα μείγματα. Έτσι ήταν σαφές ότι παρά τους ισχυρισμούς των πρώτων ιολόγων της γρίπης, δεν παρουσιάστηκε ποτέ καθαρισμένος/απομονωμένος "ιός" της γρίπης.
Ενώ η έλλειψη καθαρισμού/απομόνωσης του "ιού" της γρίπης ήταν προφανής, με ενδιέφερε πολύ να βρω τις πρώτες εικόνες των σωματιδίων που θεωρούνταν ότι ήταν ο "ιός", καθώς ούτε ένα έγγραφο "ανακάλυψης" δεν παρείχε ποτέ τέτοιες εικόνες. Κατά τη διάρκεια της αναζήτησής μου για τις πρώτες εικόνες ηλεκτρονικής μικρογραφίας διέλευσης, έπεσα πάνω σε μια μελέτη του 1945 από τον Wendell Meredith Stanley, η οποία συζητούσε τις προσπάθειες καθαρισμού του "ιού" της γρίπης για χρήση σε εμβόλια. Και αυτή η μελέτη οδήγησε σε περαιτέρω αποδείξεις για την παντελή έλλειψη οποιουδήποτε καθαρισμού/απομόνωσης του "ιού" που θεωρήθηκε ότι είναι ο ιός της γρίπης.
Πριν εξετάσουμε την έρευνά του, παραθέτουμε μερικά σύντομα αποσπάσματα για τον Stanley που βοηθούν να τοποθετήσουμε το έργο του σε μια προοπτική:
"Μετά την υποτροφία του, ο Stanley επέστρεψε στις Ηνωμένες Πολιτείες και έγινε βοηθός στο Ινστιτούτο Ιατρικών Ερευνών Rockefeller στη Νέα Υόρκη. Μετά από πρόσκληση του διευθυντή του ινστιτούτου, Simon Flexner (AAI '20), και του φυτοπαθολόγου Louis O. Kunkel, ο Stanley μεταφέρθηκε στο Τμήμα Παθολογίας Φυτών και Ζώων για να εργαστεί πάνω στον TMV το 1932, γεγονός που σηματοδότησε την εισαγωγή του στον τομέα της ιολογίας. Με την επιτυχία της πρώιμης έρευνάς του για τον TMV, ανέβηκε γρήγορα στις τάξεις του Ινστιτούτου Rockefeller και έγινε αναπληρωματικό μέλος (1937) και μέλος (1940). Όταν ανακοινώθηκε ότι το Ινστιτούτο Ροκφέλερ θα έκλεινε την πανεπιστημιούπολη του Πρίνστον το 1948, ο Στάνλεϊ μετακόμισε στο UC Μπέρκλεϊ για να ιδρύσει και να διευθύνει το Εργαστήριο Ιολογίας. Παρέμεινε στο UC Berkeley για δύο δεκαετίες, ιδρύοντας και προεδρεύοντας τόσο του Τμήματος Βιοχημείας (1948-53) όσο και του Τμήματος Ιολογίας (1958-64), πριν αποσυρθεί από τη θέση του διευθυντή του Εργαστηρίου Ιολογίας το 1969".
"Ο Wendell M. Stanley τιμήθηκε το 1946 με το βραβείο Νόμπελ Χημείας μαζί με τους John Howard Northrop και James Batcheller Sumner. Το μισό του βραβείου απονεμήθηκε στον Sumner για "την ανακάλυψή του ότι τα ένζυμα μπορούν να κρυσταλλωθούν" και το άλλο μισό απονεμήθηκε από κοινού στους Northrop και Stanley για "την παρασκευή ενζύμων και πρωτεϊνών ιών σε καθαρή μορφή". Απομονώνοντας και κρυσταλλώνοντας τον ιό του μωσαϊκού του καπνού (TMV), ο Stanley απέδειξε ότι οι ιοί θόλωσαν τα όρια μεταξύ των ζωντανών οργανισμών που μελετούν οι βιολόγοι και των μη ζωντανών μορίων που μελετούν οι χημικοί".
"Πέντε χρόνια αργότερα, ο Stanley κρυσταλλοποίησε τον TMV και υπέδειξε ότι και αυτός ήταν μια καθαρή πρωτεΐνη. Μέχρι το 1937, ωστόσο, αναγνώρισε ότι οι κρύσταλλοι του TMV ήταν στην πραγματικότητα νουκλεοπρωτεΐνες. Επιπλέον, ο Stanley απέδειξε ότι αυτές οι νουκλεοπρωτεΐνες, φαινομενικά άψυχες σε κρυσταλλική μορφή, ξαναζωντάνευαν και πολλαπλασιάζονταν όταν διαλύονταν και επανατοποθετούνταν στον καπνό. Αυτή ήταν μια επαναστατική ανακάλυψη, διότι αμφισβήτησε την ευρέως διαδεδομένη πεποίθηση ότι οι ασθένειες μεταδίδονταν μόνο από ζωντανούς οργανισμούς.
Ο Stanley συνέχισε να μελετά την ιολογία και υπηρέτησε ως εκπρόσωπος του τομέα για το υπόλοιπο της καριέρας του. Κατά τη διάρκεια του Β' Παγκοσμίου Πολέμου, πειραματίστηκε με διάφορες τεχνικές καθαρισμού του ιού της γρίπης και επινόησε μια μέθοδο για την παρασκευή του εμβολίου της γρίπης με φυγοκέντρηση".
https://www.aai.org/About/History/Notable-Members/Nobel-Laureates/WendellMStanley
"Του απονεμήθηκε το βραβείο Νόμπελ Χημείας για το 1946. Άλλα αξιοσημείωτα βραβεία του ήταν το μετάλλιο Ρόζενμπεργκερ, το βραβείο Άλντερ, το βραβείο Σκοτ και το βραβείο επιστημονικών επιτευγμάτων της AMA. Του απονεμήθηκαν επίσης τιμητικοί τίτλοι από πολλά αμερικανικά και ξένα πανεπιστήμια, όπως το Χάρβαρντ, το Γέιλ, το Πρίνστον και το Πανεπιστήμιο του Παρισιού. Τα περισσότερα από τα συμπεράσματα που είχε παρουσιάσει ο Στάνλεϊ στην έρευνα που κέρδισε το Νόμπελ αποδείχθηκαν σύντομα λανθασμένα (ιδίως ότι οι κρύσταλλοι του ιού του μωσαϊκού που είχε απομονώσει ήταν καθαρή πρωτεΐνη και συναρμολογούνταν με αυτοκατάλυση)[1]."
https://www.bionity.com/en/encyclopedia/Wendell_Meredith_Stanley.html
 |
Το πρώτο πράγμα που μου έκανε εντύπωση ήταν ότι ο Wendell Meredith Stanley ήταν ερευνητής του Ινστιτούτου Rockefeller που είχε προσκληθεί εκεί από τον Simon Flexner. Αν δεν είστε σίγουροι γιατί αυτό αποτελεί κόκκινο πανί, σας συνιστώ να ψάξετε για το πώς οι Rockefeller προσπέρασαν και αναδιαμόρφωσαν το σύστημα υγειονομικής περίθαλψης με τα πετρελαϊκά τους χρήματα στις αρχές του 1900. Τα πλοκάμια τους βρίσκονται παντού. Όσον αφορά τον Simon Flexner, μπορείτε να διαβάσετε λίγα πράγματα για τον άνθρωπο, την έρευνά του για την πολιομυελίτιδα, τις διασυνδέσεις του με τους Rockefeller και τον διαβόητο αδελφό του Abraham εδώ:
Το δεύτερο πράγμα που παρατήρησα ήταν ότι ο Stanley τιμήθηκε με βραβείο Νόμπελ (μεταξύ πολλών άλλων βραβείων) για την παρασκευή ενζύμων και πρωτεϊνών "ιού" σε "καθαρή" μορφή, παρόλο που τα περισσότερα από τα συμπεράσματά του αποδείχθηκαν λανθασμένα, συμπεριλαμβανομένων των ευρημάτων ότι τα κρυσταλλωμένα σωματίδια του "ιού" του μωσαϊκού του καπνού ήταν καθαρή πρωτεΐνη.
Ουπς.
Ανεξάρτητα από τις γκάφες του, η εργασία του Stanley του 1945 είναι μια πολύ ενδιαφέρουσα αλλά και μακροσκελής εργασία 29 σελίδων. Αν και δεν θα αναφερθώ σε ολόκληρη την εργασία, μερικά πράγματα μου τράβηξαν την προσοχή. Το ένα ήταν οι "απομονώσεις ιών" που χρησιμοποίησε για τον "καθαρισμό" που του παρείχε κάποιος Thomas Francis Jr. και το άλλο είναι η παραδοχή ότι στα υλικά των "ιών" υπήρχαν ξένες πρωτεΐνες. Ακολουθούν μερικά σύντομα αποσπάσματα:
--> Η ΠΑΡΑΣΚΕΥΗ ΚΑΙ ΟΙ ΙΔΙΟΤΗΤΕΣ ΤΩΝ ΕΜΒΟΛΙΩΝ ΚΑΤΑ ΤΟΥ ΙΟΥ ΤΗΣ ΓΡΙΠΗΣ ΠΟΥ ΈΧΟΥΝ ΣΥΜΠΥΚΝΩΘΕΙ ΚΑΙ ΚΑΘΑΡΙΣΤΕΙ ΜΕ ΔΙΑΦΟΡΙΚΗ ΦΥΓΟΚΕΝΤΡΗΣΗ
"Είναι πιθανό ότι η μεγάλη διακύμανση που έχει αναφερθεί στην αποτελεσματικότητα του εμβολιασμού με ανενεργό ιό οφειλόταν σε μεγάλο βαθμό σε τρεις αλληλένδετους παράγοντες, δηλαδή σε διαφορές στην αναλογία του ιού προς τις ξένες πρωτεΐνες στο εμβόλιο, σε διαφορές στην ποσότητα του χορηγούμενου ιού και σε διαφορές στον βαθμό καταστροφής της αντιγονικότητας του ιού κατά την αδρανοποίηση. Δεν έχει αναφερθεί εξαντλητική μελέτη αυτών των παραγόντων, αν και υπάρχουν πολλές προτάσεις στη βιβλιογραφία σχετικά με τη σημασία του καθενός. Για παράδειγµα, οι Andrewes και Smith (45) σε µια µελέτη της επίδρασης των εκχυλισµάτων ξένων ιστών στην αποτελεσµατικότητα των εµβολίων κατά του ιού της γρίπης κατέληξαν στο συµπέρασµα ότι "η σχετική φτωχοποίηση των εµβολίων που παρασκευάζονται από ετερόλογα είδη πιθανόν να οφείλεται στο γεγονός ότι τα εκχυλίσµατα ξένων ιστών παρεµποδίζουν την ανοσοποιητική απάντηση" και "ότι ο µηχανισµός των αντισωµάτων κατακλύζεται τόσο πολύ από τη µεγάλη ποσότητα ξένης πρωτεΐνης που του παρουσιάζεται, ώστε δεν µπορεί να αντιµετωπίσει τόσο αποτελεσµατικά τη µικρή ποσότητα του ιού που δέχεται ταυτόχρονα". Υπάρχει μεγάλη διακύμανση στην ποσότητα του ιού που υπάρχει στα εκχυλίσματα ιστών και στα μολυσματικά εξωεμβρυϊκά υγρά και, ως εκ τούτου, στα εμβόλια που παρασκευάζονται από αυτά τα υλικά".
Στο σύνολό τους, τα αποτελέσματα που μόλις περιγράφηκαν, καθώς και εκείνα άλλων ερευνητών (9, 20, 21, 38), παρέχουν επαρκείς αποδείξεις για την επιθυμητή προετοιμασία συμπυκνωμένων και καθαρισμένων εμβολίων, για τον προσδιορισμό των ελάχιστων ποσοτήτων επεξεργασίας που απαιτούνται για την αδρανοποίηση και για τον καθορισμό της βέλτιστης δοσολογίας για τη βέλτιστη αντισωματική απόκριση και την παραμονή αυτής της απόκρισης. Από πρακτική άποψη, τα εμβόλια αυτά θα πρέπει να καθαρίζονται επαρκώς ώστε ο ιός να αποτελεί το κύριο αντιγονικό συστατικό, να συμπυκνώνονται επαρκώς ώστε η περιεκτικότητα σε ιό να είναι αρκετές φορές μεγαλύτερη από εκείνη που υπάρχει στο μολυσματικό αλλαντοειδές υγρό και να αδρανοποιούνται κατά τρόπο ώστε να μην παρατηρείται αισθητή απώλεια ανοσοποιητικής ισχύος. Η παρούσα έκθεση καταγράφει την παρασκευή και τις ιδιότητες εμβολίων κατά του ιού της γρίπης που έχουν συμπυκνωθεί και καθαριστεί με διαφορική φυγοκέντρηση και έχουν αδρανοποιηθεί με διάφορες διαδικασίες.
--> Υλικά και Μέθοδοι
Τα στελέχη PR8, Lee και Weiss του ιού της γρίπης ελήφθησαν όλα από τον Dr. T. Francis, Jr. του Πανεπιστημίου του Michigan. Το πρόσφατο ιστορικό διέλευσης του στελέχους PR8 έχει περιγραφεί (48). Όταν το στέλεχος Lee έφθασε στο εργαστήριο αυτό, είχε απομονωθεί από κουνάβι B75 μετά από 8 περάσματα σε κουνάβια και στη συνέχεια είχε περάσει 137 φορές σε ποντίκια και 21 φορές σε έμβρυα νεοσσών. Το στέλεχος Weiss είχε περάσει 3 φορές σε κουνάβια, 23 φορές σε ποντίκια και 4 φορές σε έμβρυα νεοσσών όταν παραλήφθηκε. Μετά από 2 ή 3 περάσματα σε έμβρυα νεοσσών σε αυτό το εργαστήριο παρασκευάστηκαν μεγάλες δεξαμενές των τριών στελεχών όπως περιγράφηκε προηγουμένως (48)".
 |
Από τα παραπάνω αποσπάσματα είναι σαφές ότι το υλικό που χρησιμοποιήθηκε για τη δημιουργία εμβολίου κάθε άλλο παρά καθαρισμένο ήταν. Υπήρχαν ξένες πρωτεΐνες μέσα στα δείγματα που ο Stanley πίστευε ότι επηρέαζαν την ικανότητα να ενσταλάξουν ανοσία. Κοιτάζοντας τη διαδικασία της σειριακής διέλευσης που χρησιμοποιήθηκε για τη δημιουργία κάθε στελέχους, μπορούμε να καταλάβουμε γιατί υπήρχε αφθονία πρωτεϊνών στα δείγματα "ιού":
Το στέλεχος Lee (γρίπη Β) "απομονώθηκε" από ένα κουνάβι. Ωστόσο, προηγήθηκαν 8 περάσματα σε άλλα κουνάβια. Στη συνέχεια μεταφέρεται 137 φορές σε ποντίκια και 21 φορές σε έμβρυα νεοσσών.
Το στέλεχος Weiss (γρίπη Α) πέρασε 3 φορές σε κουνάβια, 23 φορές σε ποντίκια και 4 φορές σε έμβρυα νεοσσών.
Αυτά τα δύο στελέχη (μαζί με το PS8... αλλά περισσότερα γι' αυτό λίγο αργότερα) πέρασαν 2-3 φορές πάλι σε έμβρυα νεοσσών και στη συνέχεια και τα τρία έγιναν POOLED (δηλαδή αναμείχθηκαν) ΜΑΖΙ.
Όταν μιλάνε για σειριακή παθητικοποίηση, αυτό στο οποίο αναφέρονται είναι μια διαδικασία που δημιούργησε ο Louis Pasteur όπου ιστοί από "μολυσμένα" ζώα αλέθονται και "περνούν" μέσω επεμβατικών εμβολιασμών σε υγιή ζώα σε μια προσπάθεια να τα αρρωστήσουν. Συνεχίζουν αυτή τη διαδικασία (συχνά μέσω πολλών ζώων) μέχρι να έχουν το επιθυμητό αποτέλεσμα:
"Εναλλακτικά, μπορεί να διεξαχθεί ένα πείραμα in vivo όπου ένα ζώο μολύνεται με ένα παθογόνο και το παθογόνο αυτό αφήνεται να αναπτυχθεί σε αυτόν τον ξενιστή πριν αφαιρεθεί ένα δείγμα του από τον ξενιστή και περάσει σε έναν άλλο ξενιστή. Η διαδικασία αυτή επαναλαμβάνεται για έναν ορισμένο αριθμό ξενιστών- ο αριθμός αυτός καθορίζεται από το εκάστοτε πείραμα".
"Για να λύσει αυτό το πρόβλημα, ο Παστέρ δούλεψε με τον ιό της λύσσας in vivo."[6][7] Συγκεκριμένα, πήρε εγκεφαλικό ιστό από ένα μολυσμένο σκύλο και τον μεταμόσχευσε σε έναν άλλο σκύλο, επαναλαμβάνοντας αυτή τη διαδικασία πολλές φορές, πραγματοποιώντας έτσι σειριακό πέρασμα σε σκύλους."[6] Αυτές οι προσπάθειες αύξησαν την μολυσματικότητα του ιού. [6] Στη συνέχεια, συνειδητοποίησε ότι μπορούσε να βάλει ιστό σκύλου σε έναν πίθηκο για να τον μολύνει και στη συνέχεια να εκτελέσει σειριακή διέλευση σε πιθήκους [6] Αφού ολοκλήρωσε αυτή τη διαδικασία και μόλυνε έναν σκύλο με τον ιό που προέκυψε, ο Παστέρ συνειδητοποίησε ότι ο ιός ήταν λιγότερο μολυσματικός [6] Κυρίως, ο Παστέρ εργάστηκε με τον ιό της λύσσας σε κουνέλια [7] Τελικά, για να δημιουργήσει το εμβόλιο για τη λύσσα, ο Παστέρ χρησιμοποίησε μια απλή μέθοδο που περιελάμβανε την ξήρανση ιστού. Όπως περιγράφεται στο σημειωματάριό του:
"Σε μια σειρά από φιάλες στις οποίες ο αέρας διατηρείται σε ξηρή κατάσταση... κάθε μέρα αναστέλλεται ένα πάχος φρέσκου ιστού της σπονδυλικής στήλης κουνελιού που λαμβάνεται από ένα κουνέλι νεκρό από λύσσα. Κάθε μέρα επίσης, εμβολιάζει κανείς κάτω από το δέρμα ενός σκύλου 1 ml αποστειρωμένου μπουγιονιού, στο οποίο έχει διασκορπίσει ένα μικρό κομμάτι από ένα από αυτά τα αποξηραμένα κομμάτια σπονδυλικής στήλης, αρχίζοντας από ένα κομμάτι που απέχει χρονικά περισσότερο από τη στιγμή που το επεξεργάστηκε, για να είναι σίγουρος ότι δεν είναι καθόλου ιογενές [6].
Ο Pasteur χρησιμοποίησε ως επί το πλείστον και άλλες τεχνικές εκτός από το σειριακό πέρασμα για τη δημιουργία των εμβολίων του. Ωστόσο, η ιδέα της εξασθένησης ενός ιού μέσω της σειριακής διέλευσης εξακολουθεί να ισχύει".
https://en.m.wikipedia.org/wiki/Serial_passage
 |
Όπως ανέφερα προηγουμένως, στην περίπτωση της γρίπης, οι ερευνητές χρησιμοποίησαν μη καθαρισμένα πλυσίματα λαιμού από έναν άνθρωπο (συνήθως αναμεμειγμένα με φυσιολογικό ορό και άλλες χημικές ουσίες), τα έκαναν ένεση στη μύτη ενός κουνάβιου, σκότωσαν το κουνάβι και στη συνέχεια αλέσθηκαν οι πνεύμονες και οι ρινικοί σάλπιγγες του (επίσης αναμεμειγμένα με άλλες ενώσεις/χημικές ουσίες), τα έκαναν ένεση στη μύτη ενός υγιούς κουνάβιου και επανέλαβαν αυτή τη διαδικασία μέχρι να δουν τα συμπτώματα που ήθελαν να δουν.
Όταν είδαν αυτά τα συμπτώματα, σκότωσαν το κουνάβι, αλέσθηκαν οι πνεύμονες/ρινικές τουρμπίνες και έκαναν ένεση αυτής της γλίτσας στη μύτη ενός ποντικιού. Αυτό το ποντίκι θανατωνόταν, οι πνεύμονες/πνευμονογαστρικές του σάλπιγγες θα αλέθονταν και οι ιστοί του θα διοχετεύονταν στη μύτη ενός άλλου ποντικιού. Για άλλη μια φορά, η διαδικασία αυτή επαναλαμβανόταν μέχρι οι ερευνητές να δουν τα συμπτώματα που ήθελαν να δουν.
Στη συνέχεια, η τεμαχισμένη γλίτσα του ποντικιού εγχύθηκε σε έμβρυα νεοσσών.
Σε όλη τη διάρκεια, ένας "ιός" ΘΕΩΡΗΘΗΚΕ/ΥΠΟΤΕΘΗΚΕ ότι βρισκόταν στην τοξική γλίτσα ιστού που περνούσε από τον άνθρωπο στο κουνάβι στο ποντίκι στο έμβρυο νεοσσού, αγνοώντας τις αμέτρητες φορές που τα ζώα δεν αρρώστησαν.
Δεν ξέρω για εσάς, αλλά ένα δια-ειδικό πανηγύρι από αλεσμένη γλίτσα ιστού με πρόσθετες ενώσεις/χημικές ουσίες δεν μου ακούγεται σαν ΚΑΘΑΡΙΣΜΕΝΗ ουσία, πόσο μάλλον σαν απομόνωση οποιουδήποτε "ιού".
 |
Εν πάση περιπτώσει, τώρα που το ξεκαθαρίσαμε αυτό, πάμε στο ιστορικό διέλευσης του στελέχους PS8 που αναφέρεται στο [48] στην παραπάνω μελέτη. Πρόκειται για το πρώτο στέλεχος της γρίπης Α που "απομονώθηκε" από τον Thomas Francis Jr. το 1934. Η παραπομπή με οδήγησε σε μια άλλη ενδιαφέρουσα εργασία του Wendell Meredith Stanley από το 1944 σχετικά με την ΕΛΛΕΙΨΗ ΚΑΘΑΡΙΣΜΟΥ του "ιού" της γρίπης. Λάβετε υπόψη σας, ότι αυτό έγινε 11 χρόνια μετά την απομόνωση του "ιού" της γρίπης:
--> ΑΞΙΟΛΟΓΗΣΗ ΤΩΝ ΜΕΘΟΔΩΝ ΓΙΑ ΤΗ ΣΥΓΚΕΝΤΡΩΣΗ ΚΑΙ ΤΟΝ ΚΑΘΑΡΙΣΜΟ ΤΟΥ ΙΟΥ ΤΗΣ ΓΡΙΠΗΣ
"Η συγκέντρωση και ο καθαρισμός του ιού της γρίπης έχουν ιδιαίτερη σημασία σε σχέση με τις μελέτες για τις θεμελιώδεις χημικές και φυσικές ιδιότητες του ίδιου του ιού. Η έλλειψη γνώσης αυτών των ιδιοτήτων υπογραμμίζεται επί του παρόντος από τη διαφωνία σχετικά με μια τόσο απλή και συνάμα τόσο θεμελιώδη ιδιότητα όπως το πραγματικό μέγεθος της μολυσματικής μονάδας του ιού της γρίπης. Για μερικά χρόνια ήταν γενικά αποδεκτό ότι ο ιός αντιπροσωπεύεται από μια σφαίρα διαμέτρου περίπου 80 έως 120 mu (1, 2). Πρόσφατα, ωστόσο, οι Chambers και οι συνεργάτες του (3) και Bourdillon (4) εξασφάλισαν δεδομένα, ορισμένα από τα οποία θα μπορούσαν εύλογα να ερμηνευθούν ως υποδεικνύοντα ότι τουλάχιστον ένα τμήμα του ιού έχει μέγεθος της τάξης των 10 mu. Οι Friedewald και Pickels (5) και Taylor και συνεργάτες (6), από την άλλη πλευρά, θεωρούν, µε βάση πρόσφατα πειράµατα, ότι το µέγεθος του ιού δεν µπορεί να είναι 10 mu και ότι είναι περισσότερο κοντά σε αυτό που γινόταν δεκτό νωρίτερα. Αυτή η γενική κατάσταση, η οποία είναι ενδεικτική της έλλειψης οριστικής γνώσης των θεμελιωδών φυσικοχημικών ιδιοτήτων του ιού της γρίπης, υπογραμμίζει την ανάγκη για μελέτες σχετικά με τη συγκέντρωση και τον καθαρισμό του ιού, διότι με την παρασκευή καθαρισμένου ιού θα πρέπει να καταστεί δυνατή η διεξαγωγή πειραμάτων στα οποία μια δεδομένη φυσική οντότητα θα συσχετίζεται με τη δραστηριότητα του ιού. Η άμεση θετική συσχέτιση της δραστηριότητας του ιού με μια δεδομένη φυσική οντότητα κατά την κλασματοποίηση της εν λόγω οντότητας με διάφορες διαδικασίες θα παρείχε καλή απόδειξη ότι το παρασκεύασμα είναι ουσιαστικά καθαρό και, ως εκ τούτου, κατάλληλο για μελέτες των θεμελιωδών φυσικοχημικών ιδιοτήτων του.
Η συγκέντρωση και ο καθαρισμός του ιού της γρίπης φαίνεται επίσης να είναι σημασία σε σχέση με την πρόληψη ή τον έλεγχο της γρίπης. Πολλοί ερευνητές (7-17) έχουν δείξει ότι η χορήγηση ενεργού ή ανενεργού ιού οδηγεί σε αύξηση των κυκλοφορούντων αντισωμάτων και ο Francis (18, 19) έχει αποδείξει ότι η αύξηση αυτή συνοδεύεται από ενίσχυση της ικανότητας των ρινικών εκκρίσεων να αδρανοποιούν τον ιό. Ανεξάρτητα από τον µηχανισµό µε τον οποίο επιτυγχάνεται η σταθερή ανοσία στη γρίπη, η σηµασία της εξασφάλισης συµπυκνωµένων παρασκευασµάτων ιού υποδεικνύεται από τα ευρήµατα του Hirst και των συνεργατών του (20) ότι η µέση αντισωµατική απόκριση του ανθρώπου σχετίζεται άµεσα, αν και όχι αυστηρά αναλογικά, µε την ποσότητα του χορηγούµενου ιού. Η ευρεία χρήση του εμβρύου νεοσσού για την καλλιέργεια ιών (21) και η σημερινή αύξηση της χρήσης μολυσματικών υλικών από την πηγή αυτή για τον εμβολιασμό του ανθρώπου καθιστούν συνετή την προσπάθεια καθαρισμού του ιού της γρίπης που λαμβάνεται από έμβρυα νεοσσού, ώστε να αποφευχθούν ή να μειωθούν οι δυσκολίες που οφείλονται στην ευαισθητοποίηση του ανθρώπου στις πρωτεΐνες εμβρύου νεοσσού. Εάν δεν χρησιµοποιηθούν άµεσα, τα συµπυκνώµατα αυτά θα µπορούσαν να χρησιµοποιηθούν για την παραγωγή αντιορών που θα µπορούσαν να χρησιµοποιηθούν µε τον τρόπο που περιγράφεται από τον Smorodintseff και τους συνεργάτες του (22)".
--> Υλικά και µέθοδοι
Πηγή του ιού: Στην παρούσα εργασία χρησιμοποιήθηκε το στέλεχος PR8 του ιού της γρίπης, το οποίο παραχωρήθηκε γενναιόδωρα από τον Dr. T. Francis, Jr. του Πανεπιστημίου του Michigan. Όταν παραλήφθηκε με τη μορφή κατεψυγμένου και αποξηραμένου αϊλαντοϊκού υγρού, το στέλεχος είχε απομονωθεί από κουνάβι 198, είχε περάσει 70 φορές σε ποντίκια, 717 φορές σε καλλιέργεια ιστών και 23 φορές σε έμβρυα νεοσσών. Πέρασε δύο φορές σε έμβρυα νεοσσών σε αυτό το εργαστήριο, και μια δεξαμενή αϊλαντοϊκού υγρού από τη δεύτερη διέλευση διανεμήθηκε σε μεγάλο αριθμό σφραγισμένων αμπούλων που φυλάσσονταν σε κουτί πάγου COs. Σε εβδομαδιαία ή διμηνιαία διαστήματα, μεμονωμένες αμπούλες αυτού του εμβολίου αποθέματος αποψύχονταν, αφήνονταν σε θερμοκρασία δωματίου για περίπου 30 λεπτά με περιστασιακή ανάδευση και παρασκευαζόταν αραίωση 10 -5 με αποστειρωμένο ρυθμιστικό διάλυμα φωσφορικών 0,1 m σε pH 7. Το υπολειπόμενο εμβόλιο αποθηκεύτηκε στους 4°C. για μεταγενέστερη χρήση και δόσεις 0,1 ή 0,2 co. του αραιωμένου εμβολίου εγχύθηκαν μέσω ενός μικρού ανοίγματος στο κέλυφος πάνω από το σάκο αέρα στον αλλαντοϊκό σάκο εμβρύων White Leghorn κοτόπουλων ηλικίας 10 ημερών στους 39°C. Τα µολυσµένα έµβρυα επωάστηκαν στους 36°C. για 36 έως 48 ώρες (28), στη συνέχεια ψύχθηκαν για 2 ή περισσότερες ώρες στους 4°C. και το αλλαντοϊκό υγρό συλλέχθηκε και χρησιµοποιήθηκε ως αρχικό υλικό.
Ερυθρά αιμοσφαίρια κοτόπουλου: Τα ερυθρά αιμοσφαίρια που ελήφθησαν από ενήλικα κοτόπουλα με αποκοπή των αυχενικών αγγείων παρασκευάστηκαν όπως περιγράφεται από τους Hirst και Pickels (29). Τα ερυθρά αιμοσφαίρια φυλάσσονταν στους 4°C. σε εναιώρημα 15 έως 20% σε φυσιολογικό ορό και χρησιμοποιούνταν εντός 1 εβδομάδας από την παρασκευή τους.
Τιτλοδοτήσεις (Titrations) συγκόλλησης ερυθροκυττάρων: Οι τιτλοδοτήσεις συγκόλλησης πραγματοποιήθηκαν με τη μέθοδο του Hirst (29), όπως τροποποιήθηκε για χρήση στο παρόν εργαστήριο (30). Δυστυχώς, κατά τη διάρκεια του μεγαλύτερου μέρους της παρούσας εργασίας δεν ήταν διαθέσιμο ένα πρότυπο ιού για σκοπούς σύγκρισης, συνεπώς οι τιμές που αναφέρονται στην παρούσα εργασία δεν είναι τυποποιημένες.
Τιτλοδοτήσεις σε έμβρυα νεοσσών: Οι τιτλοδοτήσεις σε έμβρυα νεοσσών πραγματοποιήθηκαν όπως περιγράφηκε από τον Hirst (31), εκτός από το ότι χρησιμοποιήθηκε αποστειρωμένο ρυθμιστικό διάλυμα φωσφορικών 0,1 Μ σε pH 7 ως αραιωτικό αντί για φυσιολογικό ορό (32).
Προσδιορισμοί αζώτου.-Επειδή διαπιστώθηκε ότι ουσιαστικά όλο το άζωτο σε διαλύματα υλικών που καθιζάνουν δύο ή περισσότερες φορές με υψηλή ταχύτητα αποτελείται από πρωτεϊνικό άζωτο, σε αυτά τα διαλύματα έγιναν προσδιορισμοί ολικού αζώτου με τη μέθοδο Nessler (28) και οι τιμές που προέκυψαν θεωρήθηκαν ως τιμές πρωτεϊνικού αζώτου. Σε όλες τις άλλες περιπτώσεις τα δείγματα κατεργάστηκαν με ίσο όγκο θερμού l0% τριχλωροοξικού οξέος, στη συνέχεια ψύχθηκαν γρήγορα και το ίζημα συλλέχθηκε με φυγοκέντρηση. Το ίζημα διαλύθηκε σε μικρό όγκο υδροξειδίου του νατρίου 0,2 Ν και καταβυθίστηκε με 5 % τριχλωροξικό οξύ. Οι αναλύσεις με τη μέθοδο Nessler έγιναν στα πλυμένα ιζήματα. Λόγω της πιθανότητας τα διάφορα παρασκευάσματα να περιέχουν διαφορετικά ποσοστά αζώτου, οι συγκεντρώσεις των πρωτεϊνών εκφράζονται συνήθως ως πρωτεϊνικό άζωτο. Ωστόσο, τα προκαταρκτικά αποτελέσματα δείχνουν ότι οι κατά προσέγγιση συγκεντρώσεις πρωτεϊνών μπορούν να ληφθούν από τις τιμές του πρωτεϊνικού αζώτου πολλαπλασιάζοντας με τον συντελεστή 10.
Φυγοκέντρηση υψηλής ταχύτητας: Χρησιμοποιήθηκαν δύο φυγόκεντρες κενού τύπου αεροστρόβιλου που περιγράφηκαν από τους Bauer και Pickels (33). Οι κεφαλές της φυγόκεντρου, που είχαν διάμετρο 8 ιντσών, φιλοξενούσαν 14 σωλήνες Lusteroid μήκους 3 ιντσών και διαμέτρου 0,75 ιντσών σε γωνία 33° από την κατακόρυφο. Για την επιτάχυνση ή την επιβράδυνση απαιτούνταν περίπου 10 έως 15 λεπτά και στα παρόντα πειράματα η φυγοκέντρηση συνεχίστηκε για 2 ώρες στις 24.000 R.P.M. Ωστόσο, πρέπει να σημειωθεί ότι σε μεταγενέστερα πειράματα που αναφέρθηκαν αλλού (34) η φυγοκέντρηση για 20 έως 30 λεπτά βρέθηκε επαρκής για την καθίζηση του ιού της γρίπης. Κατά το τελευταίο τµήµα της εργασίας χρησιµοποιήθηκε µια εργαστηριακή φυγόκεντρος Sharples που διατίθεται στο εµπόριο. Η φυγόκεντρος ήταν εξοπλισμένη με επένδυση κυτταρινοειδούς και πηνίο ψύξης και τα πειράματα διεξήχθησαν με τρόπο παρόμοιο με αυτόν που χρησιμοποιήθηκε σε εργασίες με τον ιό του μωσαϊκού του καπνού (35).
Σταθερές καθίζησης: Οι προσδιορισμοί των σταθερών καθίζησης των καθαρισμένων παρασκευασμάτων του ιού έγιναν ευγενικά από τους Dr. M. A. Lauffer και H. K. Schachman με τη βοήθεια υπερφυγόκεντρου τύπου Bauer-Pickels (36, 37) εξοπλισμένου με οπτικό σύστημα Svensson-Philpot (38, 39). Τα διαλύματα που χρησιμοποιήθηκαν περιείχαν συνήθως περίπου 2 έως 3 rag. πρωτεΐνης ανά cc. σε ρυθμιστικό διάλυμα φωσφορικών 0,1 Μ σε pH 7. Οι σταθερές διορθωμένες σε νερό στους 20°C. δίνονται σε μονάδες Svedberg. Μια μονάδα Svedberg, συμβολίζεται με S, είναι ένας ρυθμός καθίζησης 10 "13 era. ανά δευτερόλεπτο ανά μονάδα φυγοκεντρικού πεδίου".
--> ΣΥΖΗΤΗΣΗ
"Η φυγοκέντρηση υψηλής ταχύτητας του μολυσματικού αλλαντικού υγρού φαίνεται να οδηγεί σε σχεδόν ποσοτική απομάκρυνση της δραστηριότητας CCA από το υπερκείμενο υγρό, ενώ η επεξεργασία με ερυθρά αιμοσφαίρια ενηλίκων ή εμβρυϊκών κοτόπουλων ή η μέθοδος κατάψυξης και απόψυξης επιφέρει μόνο 50 έως 90 % απομάκρυνση της δραστηριότητας CCA. Μια δεύτερη έκλουση των ερυθρών αιμοσφαιρίων ή του ιζήματος που λαμβάνεται κατά την κατάψυξη και απόψυξη ή μια δεύτερη επεξεργασία του υπερκείμενου αλλαντοειδούς υγρού με φρέσκα ερυθρά αιμοσφαίρια ή με τη μέθοδο κατάψυξης και απόψυξης αποδίδει μόνο μια μικρή ποσότητα δραστικότητας- ως εκ τούτου, αυτή η πρόσθετη επεξεργασία του αλλαντοειδούς υγρού δεν φαίνεται να έχει πρακτική σημασία. Δεδομένου ότι τα εκχυλίσματα των ερυθρών κυττάρων και το εκχύλισμα του ιζήματος που λαμβάνεται κατά την κατάψυξη και απόψυξη του αλλαντοειδούς υγρού περιείχαν πάνω από 80 % μη ειδική πρωτεΐνη, είναι προφανές ότι τα εν λόγω εκχυλίσματα ή εκχυλίσματα δεν πρέπει να χρησιμοποιούνται άμεσα για σκοπούς εμβολιασμού ή για μελέτες σχετικά με τις φυσικοχημικές ιδιότητες του ιού της γρίπης. Η διαφορική φυγοκέντρηση παρέχει ένα άμεσο μέσο για τη λήψη ενός συμπυκνωμένου και καθαρισμένου παρασκευάσματος, κατά πάσα πιθανότητα απαλλαγμένου από μεγάλες ποσότητες ανενεργών πρωτεϊνών, και επομένως φαίνεται να αποτελεί τη μέθοδο επιλογής για την προετοιμασία καθαρισμένου ιού σε μεγάλη κλίμακα για σκοπούς εμβολιασμού ή για τη μελέτη των φυσικοχημικών ιδιοτήτων".
--> ΠΕΡΙΛΗΨΗ
"Η συγκέντρωση και ο καθαρισμός του ιού της γρίπης με τη βοήθεια της διαφορικής φυγοκέντρησης σε φυγόκεντρο τύπου κενού, με προσρόφηση και έκλουση από ερυθρά αιμοσφαίρια ενήλικων κοτόπουλων, με έκλουση του ιζήματος που σχηματίζεται κατά την κατάψυξη και απόψυξη του αλλαντοειδούς υγρού, με προσρόφηση και έκλουση από ερυθρά αιμοσφαίρια εμβρυϊκών κοτόπουλων και με συνδυασμούς της πρώτης μεθόδου με καθεμία από τις τρεις επόμενες μεθόδους, έχουν μελετηθεί. Με τις μεθόδους αυτές και τους συνδυασμούς των μεθόδων επιτεύχθηκαν συνολικές αποδόσεις ιού περίπου 50 έως 70 %, εκτός από κάπως χαμηλότερες αποδόσεις όταν χρησιμοποιήθηκε προσρόφηση και έκλουση από ερυθρά αιμοσφαίρια ενήλικων κοτόπουλων. Ωστόσο, τα καθαρισμένα προϊόντα που ελήφθησαν με μεθόδους που περιλάμβαναν μόνο τη χρήση ερυθρών κυττάρων ή την τεχνική κατάψυξης και απόψυξης βρέθηκε ότι περιείχαν περίπου 80 τοις εκατό πρωτεΐνες μη ιού. Τα καθαρισµένα προϊόντα που προέκυψαν όταν χρησιµοποιήθηκε διαφορική φυγοκέντρηση είτε µόνη της είτε σε συνδυασµό µε οποιαδήποτε από τις άλλες µεθόδους βρέθηκαν να είναι δυσδιάκριτα και να αποτελούνται από ένα αρκετά οµοιογενές συστατικό µε σταθερά καθίζησης περίπου 600 S. Τέτοια παρασκευάσµατα διέθεταν περίπου 22.000 µονάδες συγκόλλησης ερυθροκυττάρων κοτόπουλου ανά mg πρωτεϊνικού αζώτου και διαλύµατα που περιείχαν µόνο περίπου 10 -14 gm. των υλικών έδωσαν 50 τοις εκατό τελικά σηµεία µολυσµατικότητας σε έµβρυα κοτόπουλου. Η φυγόκεντρος Sharples βρέθηκε να είναι σχεδόν εξίσου αποτελεσματική με τη φυγόκεντρο τύπου κενού για τη συγκέντρωση και τον καθαρισμό του ιού της γρίπης και, λόγω της μεγαλύτερης χωρητικότητάς της, συνιστάται για την παρασκευή καθαρισμένων ιών σε μεγάλη κλίμακα".
https://doi.org/10.1084/jem.79.3.255
 |
--> Συνοπτικά:
 |
Η μεγάλη διακύμανση που έχει αναφερθεί στην αποτελεσματικότητα του εμβολιασμού με ανενεργό "ιό" οφειλόταν σε μεγάλο βαθμό σε τρεις αλληλένδετους παράγοντες, συμπεριλαμβανομένων των διαφορών στην αναλογία του "ιού" προς τις ξένες πρωτεΐνες στο εμβόλιο.
Οι Andrewes και Smith (διάσημοι για τη γρίπη Α) σε μια μελέτη της επίδρασης των εκχυλισμάτων ξένων ιστών στην αποτελεσματικότητα των εμβολίων "ιού" γρίπης κατέληξαν στο συμπέρασμα ότι "η σχετική φτωχοποίηση των εμβολίων που παρασκευάζονται από ετερόλογα είδη πιθανόν να οφείλεται στο γεγονός ότι τα εκχυλίσματα ξένων ιστών παρεμβαίνουν στην ανοσοποιητική απόκριση".
Δήλωσαν επίσης ότι "ο μηχανισμός των αντισωμάτων κατακλύζεται τόσο πολύ από τη μεγάλη ποσότητα ξένης πρωτεΐνης που του παρουσιάζεται, ώστε δεν μπορεί να αντιμετωπίσει τόσο αποτελεσματικά την ελάχιστη ποσότητα του ιού που δέχεται ταυτόχρονα".
Υπήρχε μεγάλη διακύμανση στην ποσότητα του "ιού" που υπήρχε στα ιστικά εκχυλίσματα και στα μολυσματικά εξωεμβρυϊκά υγρά και, ως εκ τούτου, στα εμβόλια που παρασκευάζονταν από αυτά τα υλικά
Ο Stanley δηλώνει ότι στο σύνολό τους, τα αποτελέσματα που περιγράφονται, καθώς και εκείνα άλλων ερευνητών, παρείχαν επαρκείς αποδείξεις για την επιθυμητή παρασκευή συμπυκνωμένων και καθαρισμένων εμβολίων
Αναφέρει ότι από πρακτική άποψη, τα εμβόλια αυτά θα πρέπει να καθαρίζονται επαρκώς (όχι προφανώς εντελώς) ώστε ο "ιός" να αποτελεί το κύριο αντιγονικό συστατικό
Τα στελέχη PR8, Lee και Weiss του "ιού" της γρίπης αποκτήθηκαν όλα από τον Dr. T. Francis, Jr. του Πανεπιστημίου του Michigan.
Κατά την παραλαβή του, το στέλεχος Lee είχε "απομονωθεί" από κουνάβι B75 μετά από 8 περάσματα σε κουνάβια και στη συνέχεια είχε περάσει 137 φορές σε ποντίκια και 21 φορές σε έμβρυα νεοσσών.
Το στέλεχος Weiss είχε περάσει 3 φορές σε κουνάβια, 23 φορές σε ποντίκια και 4 φορές σε έμβρυα νεοσσών όταν παραλήφθηκε.
Μετά από 2 ή 3 περάσματα σε έμβρυα νεοσσών στο εργαστήριό του, παρασκευάστηκαν μεγάλες δεξαμενές των τριών στελεχών
(Με άλλα λόγια, ο Stanley πήρε τα μη καθαρισμένα στελέχη που του πάσσαρε κατά σειρά ο Thomas Francis Jr., τα μετέφερε 2-3 φορές ακόμη σε έμβρυα νεοσσών και στη συνέχεια τα ανακάτεψε όλα μαζί... ακούγεται καθαρισμένο/απομονωμένο αυτό;)
 |
Η συγκέντρωση και ο καθαρισμός του "ιού" της γρίπης έχουν ιδιαίτερη σημασία σε σχέση με τις μελέτες για τις θεμελιώδεις χημικές και φυσικές ιδιότητες του ίδιου του "ιού".
Η έλλειψη γνώσης αυτών των ιδιοτήτων υπογραμμίστηκε από τη διαφωνία σχετικά με μια τόσο απλή και συνάμα τόσο θεμελιώδη ιδιότητα όπως το πραγματικό μέγεθος της μολυσματικής μονάδας του "ιού" της γρίπης
Οι εκτιµήσεις για το µέγεθος κυµαίνονταν από 10 mu έως 80-120 mu
Αυτή η διαφωνία όσον αφορά το μέγεθος του "ιού" είναι ενδεικτική της έλλειψης οριστικής γνώσης των θεμελιωδών φυσικοχημικών ιδιοτήτων του "ιού της γρίπης" και, σύμφωνα με τον Stanley, υπογράμμισε την ανάγκη για μελέτες σχετικά με τη συγκέντρωση και τον καθαρισμό του "ιού"
Δήλωσε ότι με την παρασκευή καθαρισμένου "ιού", θα πρέπει να καταστεί δυνατή η διεξαγωγή πειραμάτων στα οποία μια δεδομένη φυσική οντότητα θα συσχετίζεται με τη δραστηριότητα του "ιού"
Η άμεση θετική συσχέτιση της δραστικότητας του "ιού" με μια δεδομένη φυσική οντότητα κατά την κλασματοποίηση της εν λόγω οντότητας με διάφορες διαδικασίες θα παρείχε καλή απόδειξη ότι το παρασκεύασμα είναι ουσιαστικά καθαρό και, ως εκ τούτου, κατάλληλο για μελέτες σχετικά με τις θεμελιώδεις φυσικοχημικές ιδιότητές του
Η συγκέντρωση και ο καθαρισµός του "ιού" της γρίπης φαίνεται επίσης να έχει σηµασία σε σχέση µε την πρόληψη ή τον έλεγχο της γρίπης.
Η ευρεία χρήση του εμβρύου νεοσσού για την καλλιέργεια "ιών" και η σημερινή αύξηση της χρήσης μολυσματικών υλικών από αυτή την πηγή για τον εμβολιασμό του ανθρώπου καθιστούσε συνετή την προσπάθεια καθαρισμού του "ιού" της γρίπης που λαμβάνεται από έμβρυα νεοσσού, προκειμένου να αποφευχθούν ή να μειωθούν οι δυσκολίες που οφείλονται στην ευαισθητοποίηση του ανθρώπου στις πρωτεΐνες εμβρύου νεοσσού.
Ο Stanley έλαβε τον PS8 από τον Francis Jr. με τη μορφή κατεψυγμένου και αποξηραμένου αϊλαντοϊκού υγρού, το οποίο είχε "απομονωθεί" από κουνάβι 198, είχε περάσει 70 φορές σε ποντίκια, 717 φορές σε καλλιέργεια ιστών και 23 φορές σε έμβρυα νεοσσών.
Πέρασε δύο φορές σε έμβρυα νεοσσών στο εργαστήριο του Stanley, και μια δεξαμενή αϊλαντοϊκού υγρού από τη δεύτερη διέλευση διανεμήθηκε σε μεγάλο αριθμό σφραγισμένων αμπούλων που φυλάσσονταν σε κουτί με πάγο CO2
Τα ερυθρά αιμοσφαίρια ελήφθησαν από ενήλικα κοτόπουλα με την αποκοπή των αυχενικών αγγείων και τα ερυθρά αιμοσφαίρια αποθηκεύτηκαν στους 4°C σε εναιώρημα 15 έως 20% σε φυσιολογικό ορό και χρησιμοποιήθηκαν εντός 1 εβδομάδας από την προετοιμασία τους.
Κατά τη διάρκεια του μεγαλύτερου μέρους της εργασίας του Stanley, δεν ήταν διαθέσιμο ένα πρότυπο "ιού" για την τιτλοδότηση συγκόλλησης ερυθρών κυττάρων για σκοπούς σύγκρισης, ως εκ τούτου οι αναφερόμενες τιμές δεν ήταν τυποποιημένες
Για τον προσδιορισμό του αζώτου, υπέθεσε ότι όλες οι τιμές που ελήφθησαν ήταν τιμές πρωτεϊνικού αζώτου, δεδομένου ότι ουσιαστικά όλο το άζωτο σε διαλύματα υλικών που καθιζάνονταν δύο ή περισσότερες φορές σε υψηλή ταχύτητα βρέθηκε να αποτελείται από πρωτεϊνικό άζωτο.
Λόγω της πιθανότητας τα διάφορα παρασκευάσματα να περιέχουν διαφορετικά ποσοστά αζώτου, οι συγκεντρώσεις της πρωτεΐνης εκφράζονταν συνήθως ως πρωτεϊνικό άζωτο
Τα πειράματα διεξήχθησαν με τρόπο παρόμοιο με εκείνον που χρησιμοποιήθηκε στις εργασίες με τον "ιό" του μωσαϊκού του καπνού (οι οποίες αργότερα διαπιστώθηκε ότι ήταν ανακριβείς)
Η φυγοκέντρηση υψηλής ταχύτητας του μολυσματικού αλλαντικού υγρού φάνηκε να οδηγεί σε σχεδόν ποσοτική απομάκρυνση (με άλλα λόγια, όχι σε πλήρη απομάκρυνση) της δραστηριότητας CCA από το υπερκείμενο υγρό, ενώ η επεξεργασία με ερυθρά αιμοσφαίρια ενηλίκων ή εμβρυϊκών κοτόπουλων ή η μέθοδος κατάψυξης και απόψυξης επιφέρει μόνο 50 έως 90 τοις εκατό απομάκρυνση της δραστηριότητας CCA
Δεδομένου ότι τα εκχυλίσματα των ερυθροκυττάρων και το εκχύλισμα του ιζήματος που λαμβάνεται κατά την κατάψυξη και απόψυξη του αλλαντικού υγρού περιείχαν πάνω από 80 % μη ειδική πρωτεΐνη, είναι προφανές ότι τα εν λόγω εκχυλίσματα ή εκχυλίσματα δεν πρέπει να χρησιμοποιούνται άμεσα για σκοπούς εμβολιασμού ή για μελέτες σχετικά με τις φυσικοχημικές ιδιότητες του "ιού" της γρίπης
Ο Stanley κατέληξε στο συµπέρασµα ότι η διαφορική φυγοκέντρηση παρείχε ένα άµεσο µέσο για τη λήψη ενός συµπυκνωµένου και "καθαρισµένου" παρασκευάσµατος, κατά πάσα πιθανότητα απαλλαγµένου από µεγάλες ποσότητες ανενεργών πρωτεϊνών, και εποµένως φάνηκε να αποτελεί τη µέθοδο επιλογής για την παρασκευή σε µεγάλη κλίµακα καθαρισµένου "ιού" για σκοπούς εµβολιασµού ή για τη µελέτη φυσικοχηµικών ιδιοτήτων.
Οι µέθοδοι "καθαρισµού" που µελετήθηκαν περιλαµβάνουν:
Διαφορική φυγοκέντρηση σε φυγόκεντρο τύπου κενού.
Προσρόφηση και έκλουση από ερυθρά αιμοσφαίρια ενήλικων κοτόπουλων
Έκλουση του ιζήματος που σχηματίζεται κατά την κατάψυξη και απόψυξη του αλλαντικού υγρού
Προσρόφηση και έκλουση από ερυθρά αιμοσφαίρια εμβρυϊκών κοτόπουλων
Συνδυασµοί της πρώτης µεθόδου µε καθεµία από τις τρεις επόµενες µεθόδους
Συνολικές αποδόσεις του "ιού" περίπου 50 έως 70 % επιτεύχθηκαν με τις μεθόδους και τους συνδυασμούς μεθόδων που μελετήθηκαν, εκτός από κάπως χαμηλότερες αποδόσεις όταν χρησιμοποιήθηκε προσρόφηση σε και έκλουση από ερυθρά αιμοσφαίρια ενηλίκων κοτόπουλων.
Τα "καθαρισµένα" προϊόντα που ελήφθησαν µε µεθόδους που περιλάµβαναν µόνο τη χρήση ερυθρών κυττάρων ή την τεχνική κατάψυξης και απόψυξης βρέθηκε ότι περιείχαν περίπου 80 % πρωτεΐνη "µη ιού".
Τα "καθαρισµένα" προϊόντα που προέκυψαν όταν χρησιµοποιήθηκε η διαφορική φυγοκέντρηση είτε µόνη της είτε σε συνδυασµό µε οποιαδήποτε από τις άλλες µεθόδους διαπιστώθηκε ότι ήταν δυσδιάκριτα και ότι αποτελούνταν από ένα αρκετά οµοιογενές συστατικό.
Τα παρασκευάσµατα αυτά διέθεταν περίπου 22.000 µονάδες συγκόλλησης ερυθρών αιμοσφαιρίων κοτόπουλου ανά mg πρωτεϊνικού αζώτου και τα διαλύµατα που περιείχαν µόνο περίπου 10 -14 gm. των υλικών έδωσαν 50 τοις εκατό τελικά σηµεία µολυσµατικότητας σε έµβρυα κοτόπουλου.
Σύμφωνα με τον Stanley, ο καθαρισμός της γρίπης έχει ιδιαίτερη σημασία για τη μελέτη των θεμελιωδών χημικών και φυσικών ιδιοτήτων ενός "ιού". Ωστόσο, αυτό δεν επιτεύχθηκε ποτέ και γι' αυτό υπήρξε διαφωνία σχετικά με το μέγεθος του "ιού" της γρίπης. Οι ερευνητές δεν μπορούσαν στην πραγματικότητα να δουν κανέναν "ιό", οπότε προσπάθησαν να μαντέψουν ένα μέγεθος με βάση έμμεσες μετρήσεις. Αυτό ανέδειξε την έλλειψη γνώσης μέχρι εκείνη τη στιγμή σχετικά με τον υποτιθέμενο "ιό". Στην πραγματικότητα, χωρίς τον πλήρη καθαρισμό/απομόνωση των σωματιδίων που θεωρούνταν "ιός", δεν μπορούσε να υπάρξει άμεση θετική συσχέτιση μεταξύ μιας φυσικής οντότητας και της ασθένειας που λέγεται ότι παρήγαγε. Ακόμα και με αυτή την παραδοχή του Stanley ότι δεν υπήρχε καθαρισμένος/απομονωμένος "ιός" (11 χρόνια μετά την υποτιθέμενη απομόνωση ενός "ιού" γρίπης που έλαβε χώρα το 1933), είναι προφανές ότι εξετάζοντας τη δημιουργία του PS8 από τον Francis Jr. το 1934, ο "ιός" ήταν ένα μη καθαρισμένο χάος:
"Το στέλεχος PS8 που προμηθεύτηκε ο Thomas Francis Jr. παραλήφθηκε με τη μορφή κατεψυγμένου και αποξηραμένου αλλαντικού υγρού και είχε απομονωθεί από κουνάβι 198, πέρασε 70 φορές σε ποντίκια, 717 φορές σε καλλιέργεια ιστών και 23 φορές σε έμβρυα νεοσσών"
Λάβετε υπόψη ότι ο καθαρισμός και η απομόνωση οποιουδήποτε "ιού" πρέπει να παρουσιάζεται στην αρχική εργασία (ή στις αρχικές εργασίες) που ισχυρίζονται την ανακάλυψη οποιουδήποτε "ιού". Αυτό δεν είναι ένα βήμα που μπορεί να αφεθεί σε "μελλοντικές μελέτες" από διαφορετικούς ερευνητές που χρησιμοποιούν διαφορετικά υλικά και μεθόδους. Αυτή η διαδικασία πρέπει να πραγματοποιηθεί πρώτα πριν από την προβολή οποιουδήποτε ισχυρισμού. Δυστυχώς, η ιολογία έχει την πολύ κακή συνήθεια να ανακοινώνει πάντα τον καθαρισμό και την απομόνωση "ιών" χωρίς ποτέ να το αποδεικνύει άμεσα.
Θα πρέπει να είναι σαφές ότι η σειριακή διέλευση ενός υποτιθέμενου "ιού" σε ζώα δεν συνιστά καθαρισμό και δεν υπήρχε ΚΑΜΙΑ ΦΥΣΙΚΗ ΟΥΣΙΑ που οι ερευνητές θα μπορούσαν να χρησιμοποιήσουν για άμεση θετική συσχέτιση με τη δραστηριότητα του "ιού", επομένως δεν υπήρξε απομόνωση 11 χρόνια μετά την απομόνωση ενός "ιού". Αν και ήταν ωραία η επιβεβαίωση του Stanley για την έλλειψη ενός καθαρισμένου/απομονωμένου "ιού" γρίπης, είναι προφανές ότι τα απαιτούμενα βήματα δεν πραγματοποιήθηκαν όταν διαβάζετε τα αρχικά έγγραφα:
Γρίπη των χοίρων:
Richard Shope Swine Flu Paper (1931)
Γρίπη Α:
Thomas Francis Jr. απομόνωσε τη γρίπη Α το 1934;
Απομόνωσε ο Thomas Francis Jr. τη γρίπη Α το 1937;
Γρίπη Β:
Απομόνωσε ο Thomas Francis Jr. τη γρίπη Β το 1940;
Αυτή η έλλειψη καθαρισμού/απομόνωσης είναι ο λόγος για τον οποίο το CDC παραδέχθηκε τον Μάρτιο του 2021 ότι δεν μπορούσε να βρει κανένα αρχείο οποιουδήποτε είδους σχετικά με τον καθαρισμό/απομόνωση του "ιού" της γρίπης.
 |
Με άλλα λόγια:
 |
---Δικτυογραφία :
Further Proof The Influenza “Virus” Was Never Purified and Isolated – ViroLIEgy
https://viroliegy.com/2021/11/26/further-proof-the-influenza-virus-was-never-purified-and-isolated/
Αναρτήσεις
ΟΙ ΥΓΕΙΟΝΟΜΙΚΟΙ
ΑπάντησηΔιαγραφήΔΕΝ ΣΑΣ ΤΑ ΕΊΠΑΝ ΑΥΤΆ ΟΜΩΣ...
🤔